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大鼠角膜上皮細胞【Rat Eye: Normal Corneal Epithelial Cells】

 產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的大鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩(wěn)定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

亞硝基紅鹽shēng huà shì jì容量：RT，避光10克  HumanImmunoglobulinM，IgMELISAKit人免疫球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-乙酰神經(jīng)酸 (-20℃)NA  人血小板因子3(PF-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

L-賴酸鹽酸鹽1克RT  豬(NO)免疫試劑盒 Pig niic oxide,NO ELISA Kit

美替拉酮 Metyrapone,96% 54-36-4 1G 通用試劑  HumanCobravenomneuronalprotectivefactor,CVNPFELISAKit 人神經(jīng)保護因子(CVNPF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

帶(片狀)(*)(易制暴) Litium 7439-93-  HumanleukocyteaigenE,HLA-EELISA試劑盒人類白細胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
四草酸鉀shēng huà shì jì容量：保存：-20℃250毫克  HumanLactoferrinaibodyIgG,LF/LTFAb-IgGELISA試劑盒人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTFAb-Ig)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

UV-327(進分)NA  組織硫酸酶(rhodanase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

5-溴-4錄-3-吲哚-β-D-半乳糖苷1公斤  HumaniactParathormone,i-PTHELISAKit人全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

氧化槐定堿 Oxysophoridine,98% 54809-74-4 1G 通用試劑  人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

亞油醋標準液(+4℃) Linolqic ccid 60-33-3  豬早老素1(PS-1)免疫試劑盒 Pig Presenilin 1,PS-1 ELISA Kit
牛血清白蛋白標準溶液shēng huà shì jì容量：1公斤  冰凍切片神經(jīng)纖維免疫熒光染色(PGP9.5)試劑盒10次

CollagenII 1g Worthington原裝  Ratbasicfibroblastgrowthfactor6,bFGF-6ELISA試劑盒大鼠堿性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

直鏈淀粉5克RT  小鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

別嘌醇相關(guān)物質(zhì)B cllopurinol Rqlctqd CoMpound B;5-(forMylcMino)-1H-pyrczolq-4-ccrboxcMidq 407-0-1  Rat iercellular adhesion molecule 2 (ICAM-2/CD102) ELISA Kit 大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒

2-巰基安言醋鹽 Cystqcminq xy7nochloridq 126-27-0  Humanangiotensinogen,aGTELISAKit 人血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
大鼠角膜上皮細胞抗痛素，英文名或英文縮寫：Antipain dixy7nochloride，級別：生物技術(shù)級，600u/mg，規(guī)格：100克  人肌球蛋白輕鏈(MLC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

(LB肉湯)  小鼠催乳素釋放激素(PRH)免疫試劑盒 Mouse prolactin-releasing hormone,PRH ELISA Kit

L-2-AminobutyricacidL(+)-2-基25克BR，98.5%  血管生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒 ，英文名： ANG-4 ELISA Kit

BXC  MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISA試劑盒小鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

利 2-Chloroethylphosphonic acid (≥96%, E... 16672-87-0 500MG 通用試劑  ELISAKitHIS豚鼠組胺規(guī)格：48T/96T

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。