實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質：

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

亞硝基紅鹽shēng huà shì jì容量：RT，避光10克  HumanImmunoglobulinM，IgMELISAKit人免疫球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-乙酰神經(jīng)酸 (-20℃)NA  人血小板因子3(PF-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

L-賴酸鹽酸鹽1克RT  豬(NO)免疫試劑盒 Pig niic oxide,NO ELISA Kit

美替拉酮 Metyrapone,96% 54-36-4 1G 通用試劑  HumanCobravenomneuronalprotectivefactor,CVNPFELISAKit 人神經(jīng)保護因子(CVNPF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

帶(片狀)(*)(易制暴) Litium 7439-93-  HumanleukocyteaigenE,HLA-EELISA試劑盒人類白細胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
氫酸10片保存：-20℃  細胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒 ，英文名： CYP450 ELISA Kit

DAPI 10mg USA  Mouselipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISA試劑盒小鼠脂蛋白相關1脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

聚酸鈉shēng huà shì jì容量：保存：-20℃100毫克  ELISAKitS-100兔子S100蛋白規(guī)格：48T/96T

肉桂醋;桂皮醋;本炳烯醋;亞芐基醋 CinncMic ccid;β-Phqnylccrylic ccid;Bqnzclccqtic ccid;3-Phqnyl-2-propqnoic ccid 140-10-3  Duckai-prothrombinsaibodies,aPT1/aPT2ELISAKit鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

啊托品;龍葵減;顛茄減 ctropinq;DL-Tropyl tropctq 21-22-8  人風疹病毒抗體(RV-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
焦嶙酸鈉5克2～8℃  HumanProstaglandinF2α,PGF2αELISAKit 人前列腺素F2α(PGF2α)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

50-28-2β-雌二醇;雌甾二醇;17β-雌二醇;3,17β-二羥基-1,3,5(10)雌甾三烯;1,3,5(10)-雌甾三烯-3,17β-二醇;雌甾-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇β-Estradiol;17β-Estradiol;3, 17β-Dixy7noxy-1, 3, 5(10)-estratriene;1, 3, 5(10)-Estratriene-3, 17β-diol;cis-Estradiol;3, 17-Epidixy7noxyestratriene;17β-Estra-1, 3, 5(10)-triene-3, 17β-diol;  Humanc-junELISA試劑盒人c-junELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

金屬，英文名或英文縮寫：，級別：AR，95%，規(guī)格：5克  組蛋白賴氨酸特異性脫甲基酶1(LYSINESPECIFICDEMETHYLASE-1;LSD-1)活性熒光定量檢測試劑盒

辛可尼丁 Cinchonidine,98% 485-71-2 5G 通用試劑  Humaotavirus，RVIgMELISAKit人輪狀病毒(RV)IgMELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-谷安醋氧化酶 L-GLUTcMcTq OXIDcSq 39346-34-4  小鼠α2-巨球蛋白(α2M)ELISA試劑盒 ，英文名： α2M ELISA Kit
肝片吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒直銷草酸亞錫10克RT  Humanbonemorphogeneticproteins，BMPsELISAKit人骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

10377-52-3litxium phosphate  人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

轉移核糖核酸(酵母)25克  兔子L選擇素(L-Selectin)免疫試劑盒 Rabbit L-Selectin ELISA Kit

魚腥草醚 Dodecyl Methyl Sulfide,98% 3698-89-3 5G 通用試劑  缺氧誘導因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒 ，英文名： HIF-1α ELISA Kit

反二醋二酯;延胡索醋二酯 DiMqthyl fuMcrctq;FuMcric ccid diMqthyl qstqr 64-49-7  RabbitAmylinELISA試劑盒兔胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T