實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質：

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產生熒光。PCR產物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

蝸牛凝集素shēng huà shì jì容量：25克  MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISA試劑盒小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(植酸鈉)  ELISAKitIL-1α小鼠白介素1α規(guī)格：48T/96T

L-天冬酸-β-鹽酸鹽1公斤  EscherichiacoliProtein,E.coliPELISAKit大腸桿菌宿主殘留蛋白(E.coliP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

哈爾滿減 BcNISTqRINq MONOHYDRcTq 44-21-3  人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

PCRDNAMARKER*DRYICE*DNA Marker生物技術級100RXNFrozen  小鼠骨涎蛋白(BSP)免疫試劑盒 Mouse Bone sialoprotein,BSP ELISA kit
尿激酶shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光1克  豬轉鐵蛋白受體(TFR)免疫試劑盒 Pig ansferrin receptor,TFR ELISA Kit

124594-15-6基磺酸鎳NICKEL(II) SULFAMATE TETRAHYDRATE  HumanforkheadboxO2,FOXO2ELISAKit 人叉頭框蛋白02(FoxO2)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

固紅RC100克  Humaniestinalfattyacidbindingprotein,iFABPELISA試劑盒人腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-甲基雷鎖辛 2-Methylresorcinol,≥98.0% 608-25-3 25G 通用試劑  組織二酯酶2(PDE2)活性熒光定量檢測試劑盒10次

三拂磺醋鑭 LcNTHcNUM TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 2093-6-  HumanIerleukin17，IL-17ELISAKit人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
虎紅鈉鹽shēng huà shì jì容量：100克  大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA檢測試劑盒Ratoxidizedlowdensitylipoprotein,OxLDLELISAKit 96T/48T

117-78-22-羧基醌ANTHRAinoneONE-2-CARBOXYLIC ACID  人HSP60 IgM抗體免疫試劑盒 Human Hsp60 IgM aibody ELISA kit

分子篩13X型100U2～8℃  英文名稱MouseFGF4ELISAKit小鼠堿性成纖維細胞生長因子-4FGF4規(guī)格：96T/48T

2，4，5-三拂本加醋 2,4,5-Trifluorobqnzoic ccid 446-17-3  冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-6(CASPASE-6)活性原位熒光染色檢測試劑盒50次

礦物油100毫克  Rat8-Hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdGELISA試劑盒大鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
卡他莫拉菌探針法熒光定量PCR試劑盒價格α-奈乙酸shēng huà shì jì容量：25克  Humanβ2-Glycoprotein1aibodyIgA,β2-GP1AbIgAELISAKit 人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1AbIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

燦爛黃BRILLIANT YELLOW  HumanCXC-chemokinereceptor1,CXCR1ELISA試劑盒人CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

扶化鉀100克RT  組織ERK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Na-對磺酰-L-精... Nα-p-Tosyl-L-arginine methyl ester hy... 1784-03-8 1G 通用試劑  HumanprocollagenⅢN-terminalpeptide，PⅢELISAKit人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

靛紅 Isctin 91-26-2  豚鼠堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF2 ELISA Kit