人VEGFR3elisa檢測試劑盒說明書Human VEGFR3 ELISA Kit 產(chǎn)品名稱 | 人VEGFR3elisa檢測試劑盒說明書 | 英文名稱 | Human VEGFR3 ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
 人VEGFR3elisa檢測試劑盒說明書Human VEGFR3 ELISA Kit【實驗用途】VEGFR1(Flt-1)屬于受體酪氨酸激酶(RTKs)家族第三亞族。VEGFR1,2,3幾乎都在內(nèi)皮細(xì)胞上表達,這些受體裁在血管增生和血管形成過程中起基本作用。VEGFR3的前體有1298個氨基酸。成熟形態(tài)包括751個氨基酸的細(xì)胞外部分,22個氨基酸的跨膜區(qū)和482個氨基酸的細(xì)胞內(nèi)部分。VEGF-C和VEGF-D都能結(jié)合并激活VEGFR3。VEGFR3對淋巴管的形成有重要作用。提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。。 試劑配制: 1、人VEGFR3elisa檢測試劑盒說明書酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。 2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。 3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 樣本處理及要求: 1.人VEGFR3elisa檢測試劑盒說明書血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。 仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。 2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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