人成骨組織提取物【Bone: Normal Human Bone Derivatives】

骨組織是一種堅硬的結(jié)締組織，是由細胞、纖維和基質(zhì)構(gòu)成的。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體成骨組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

β-Glycerol phosphate β-甘油磷酸二鈉鹽五水   25g/g 3-(Boc-Amino)piperidine99568
β-葡萄糖苷酶   mgLinagliptin66822利拉利汀
矮壯素   1g Telmisartan tert-butyl ester14426
半纖維素酶(Hemicellulase)   5KUFluoronaphthalene3218
崩潰酶   0mg1-Naphthol5
Estradiol  中文名：雌二醇  分子式：C18H24O2  度：99.0%  兔子胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISAKit   
Estrone  中文名：雌酮  分子式：C18H22O2  度：99.0%  兔子胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISAKit   
Cynatratoside A  中文名：白薇苷A  分子式：C28H40O8  度：98.5%  兔子胰島素(INS)ELISAKit               
Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12  度：%  兔色素上皮衍生因子elisa試劑盒   兔色素上皮衍生因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔色素上皮衍生因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔色素上皮衍生因子試劑盒、兔色素上皮衍生因子 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
Sprengerinin C  中文名：  分子式：C44H70O16  度：98.0%  兔熱休克蛋白90elisa試劑盒   兔熱休克蛋白90試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔熱休克蛋白90試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔熱休克蛋白90試劑盒、兔熱休克蛋白90 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
三氧化二鉻(>99%，BR)  Chromium (III) oxide  質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR 高質(zhì)化膠回收試劑盒20
四氧化三鈷(>99%，BR)  Cobalt (II, III ) oxide  質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR 高質(zhì)化聚烯酰胺凝膠粉碎法膠回收試劑盒20
乙酸鈷四水(>99.5%,BR)  Cobaltous acetate, tetrahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,BR 高質(zhì)型ECL化學(xué)發(fā)光顯影試劑盒10
鈷粉(>99%，BR)  Cobaltous powder  質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR 高質(zhì)型ECL印跡化學(xué)發(fā)光溶液A液：100毫升B液：500微升1000cm2
銅粉(>99.5%,BR)  Copper powder  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,BR 革蘭氏陽性細菌基因組DNA化試劑盒20
堿式碳酸銅(銅度：52.5~56.5%)  Copper(II) carbonate basic  質(zhì)量規(guī)格：度(銅)：52.5~56.5% 革蘭氏陽性細菌基因組DNA化試劑盒20
氧化銅粉(>99%,BR)  Copper(II) oxide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 革蘭氏陰性細菌基因組DNA化試劑盒20
焦磷銅  Copper(II) pyrophosphate  質(zhì)量規(guī)格：(Cu):36.0~38.0%,Tech Grade 革蘭氏陰性細菌基因組DNA化試劑盒20
銅三水(>98%,BR)  Copper(II) tartrate, trihydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 谷氨酸待測樣品處理試劑盒20
2'-脫氧腺苷5'二三鈉鹽(>97%,BR)  dADP  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 谷氨酰胺待測樣品處理試劑盒20
人成骨組織提取物價格兔基質(zhì)金屬蛋白酶-12(rabbit MMP-12)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-Oxododecanedioic acid  30828-09-2  中文名：  分子式：C12H20O5  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
兔基質(zhì)金屬蛋白酶-1(rabbit MMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6-carboxylic acid  中文名：  分子式：C12H14N2O2  度：98.0%
兔基質(zhì)金屬蛋白酶 2   英文名稱：   Rabbit Maix Metalloproteinase 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-2  5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C5H3ClO2S  
兔基質(zhì)金屬蛋白酶 1   英文名稱：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-1  5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C5H3ClO2S  度：98.0%
兔基質(zhì)金屬蛋白9（MMP-9）ELISA試劑盒     4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  122475-42-7  中文名：  分子式：C18H24N4O18  度：%  關(guān)鍵詞：

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。