人腎癌組織源細(xì)胞提取物【Human Cancer: Kidney Cancer Tissues Cells Derivatives】

人腎癌組織源細(xì)胞提取物是從人原代腎癌組織源細(xì)胞提取的，人原代腎癌組織源細(xì)胞從人腎癌組織制備。人腎癌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

肉毒桿菌B型單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Trityl candesartan cilexetil17919

肉毒桿菌EF型雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Trityl candesartan1394812

肉毒桿菌E型單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Candesartan1394819坎地沙坦

肉毒桿菌F型單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Candesartan ethyl ester1394818

痢疾桿菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒487-Amino-methyl-cephem-carboxylic acid222523
Miconazole nitrate  22832-87-7  中文名：硝酸咪康唑  分子式：C18H15Cl4N3O4  度：98.0%      小鼠胃動素(MTL)ELISA試劑盒  

Metronidazole  443-48-1  中文名：甲硝唑  分子式：C6H9N3O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA試劑盒  

Metoclopramide  364-62-5  中文名：甲氧氯普胺  分子式：C14H22ClN3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒  

Methyltestosterone  58-18-4  中文名：甲基睪酮  分子式：C20H30O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠維生素K1(VK1)ELISA試劑盒           

Methylprednisolone hemisuccinate  2921-57-5  中文名：  分子式：C26H34O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠維生素D結(jié)合蛋白   英文名稱：   Mouse Vitamin D Binding protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DBP
鹽酸小檗堿,鹽酸黃連素  Berberine hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：≥97%(T)，BR 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP-4/CCL13 ELISA Kit

鹽酸小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)  Berberine hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白5(MCP5)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP5 ELISA Kit

京尼平苷酸  Geniposidic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98% 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白5(MCP-5)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP-5 ELISA Kit

京尼平苷酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  Geniposidic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠單酰輔酶A(malonyl CoA)ELISA試劑盒 ，英文名： malonyl CoA ELISA Kit

原兒茶酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  3,4-Dihydroxybenzoic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠單氧化酶A(MAOA)ELISA試劑盒 ，英文名： MAOA ELISA Kit

原兒茶醛,3,4-二羥基  3,4-Dihydroxybenzaldehyde  質(zhì)量規(guī)格：≥98% 小鼠膽(CH)ELISA試劑盒 ，英文名： CH ELISA Kit

原兒茶醛(標(biāo)準(zhǔn)品)  3,4-Dihydroxybenzaldehyde  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

甲砜霉素甘氨酸酯鹽酸鹽  Thiamphenicol glycinate HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA檢測試劑盒Mousecholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit 96T/48T

2.4-二羥基-6-甲基-煙酸乙酯  Ethyl 2,4-dihydroxy-6-methylnicotinate  質(zhì)量規(guī)格：>98% 小鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒 ，英文名： CETP ELISA Kit

恩拉霉素,持久殺菌素  Enduracidin  質(zhì)量規(guī)格：BR,含量8%以上 小鼠膽堿0酸甘油酯(PC/CPG)ELISA試劑盒 ，英文名： PC/CPG ELISA Kit
人腎癌組織源細(xì)胞提取物說明書Wright's-GiemsaStainingSolion  3-Amino-3-phenyl-1-propanol  14593-04-5  中文名：3-氨基-3-苯基-1-丙醇  分子式：C9H13NO 

Umbelliferone   25g                 4-Aminobenzophenone  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO 

Tween80   250ml  4-Aminobutyric acid  1956/12/2  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2 

TMB   1g                 4-(Phenylthio)benzyl alcohol  中文名：  分子式：C13H12OS 

TMA   500g  4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene  1533-45-5  中文名：4,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪  分子式：C28H18N2O2

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。