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大鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取物【Rat Lung: Normal Vein Smooth Muscle Cell Derivatives】

大鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取物是從大鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取的，大鼠肺大靜脈平滑肌細胞從正常大鼠肺大靜脈組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

霍亂弧菌O139/O1雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Cilnidipine132西尼地平

腸出血型大腸桿菌EHEC O157/H7雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Gefitinib1844755吉非替尼

腸出血型大腸桿菌EHEC O4/H4雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Erlotinib1833214埃羅替尼

大腸桿菌O4/O157雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒482-Flurbiprofen5154氟比洛芬

大腸桿菌致賀毒素（Stx1）/（Stx2）雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒482-(3-Methoxypropyl)-oxo,4-dihydroH-thieno[3,2-e][1,2]thiazine-sulfonamide 1,1-dioxide1541271
HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISA試劑盒人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  11β,17α-Dihydroxy-6α-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione  中文名：  分子式：C22H30O4 

HumanDihydrotestosterone,DHTELISA試劑盒人雙氫睪同(DHT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  12-Aminolauric acid  693-57-2  中文名：12-氨基十二酸  分子式：C12H25NO2 

humandihydropyrimidinase-like3,DPYSL3ELISA試劑盒人二氫嘧啶酶樣3(DPYSL3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  12-Hydroxyjasmonic acid  中文名：12-羥基酸  分子式：C12H18O4 

humandihydropyrimidinase-like2,DPYSL2ELISA試劑盒人二氫嘧啶酶樣2(DPYSL2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  15,16-Dihydroxyoctadeca-9Z,12Z-dienoic acid  140129-22-2  中文名：  分子式：C18H32O4 

HumanDickkopf1,DKK1ELISA試劑盒人Dickkopf1(DKK1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  16-Acetoxy-7-O-acetylhorminone  中文名：  分子式：C24H32O7
脫氧熊果苷 HPLC≥98% 20mg HumanCenomereProtein,CENP-BELISAKit 人著絲粒蛋白B(CENP-B)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

脫氧野尻霉素 HPLC≥98% 5mg HumanCholicacidELISAKit 人膽酸(Cholicacid)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

脫乙酰靈芝酸F HPLC≥98% 5mg Humanchondroitinsulfate,CSELISAKit 人硫酸軟骨素(CS)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

拓?fù)涮婵?/span> HPLC≥98% 20mg HumanChromogranin,CgAELISAKit 人嗜鉻蛋白A(CgA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

王不留行環(huán)肽A HPLC≥98% 10mg Humancirculatingimmunecomplex,CICELISAKit 人循環(huán)復(fù)合物(CIC)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

王不留行環(huán)肽B HPLC≥98% 5mg HumancoagulationfactorⅩ,FⅩELISAKit 人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

王不留行黃酮苷 HPLC≥98% 20mg humancoicoopieleasinghormone,CRHELISAKit 人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素A HPLC≥98% 20mg Humancomplemeconolprotein,CCPELISAKit 人補體調(diào)節(jié)蛋白(CCP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素A醋酸酯 HPLC≥99% 20mg HumanComplemefragme4a,C4aELISAKit 人過敏/補體片斷4(C4a)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素A酸 HPLC≥99% 20mg HumanComplemefragme5a,C5aELISAKit 人補體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
大鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取物說明書人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3Gelisa試劑盒   人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒、人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     2-Chloro-1-(5'-(prop-1-ynyl)-2,2'-bithiophen-5-yl)ethanol  中文名：  分子式：C13H11ClOS2 

人絲切蛋白1(CFL1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human CFL1(Cofilin 1, Non-Muscle) ELISA Kit                 2-Aminofluorene  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N 

人瘦素受體(LEPR)ELISAKit     Tiagabine hydrochloride  中文名：鹽酸噻加賓  分子式：C20H26ClNO2S2 

人瘦素 (Leptin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     α-Spinasterone  23455-44-9  中文名：  分子式：C29H46O 

人嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)ELISAKit     2-Cyano-N-[4-(Trifluoromethyl)Phenyl]Acetamide  24522-30-3  中文名：  分子式：C10H7F3N2O

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。