實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì)：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過(guò)溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過(guò)程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì)，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。
（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

正辛酸shēng huà shì jì容量：1克  小鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒 Mouse cytotoxic T lymphocyte associated aigen 4,CTLA-4 ELISA Kit
Pentobarbitalwo7ium 5g/10g/25g 用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  札如病毒(SV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T
E-64E-64蛋白組學(xué)級(jí)5MG66701-25-5Frozen  Humansexhormone-bindingglobulin,SHBGELISA試劑盒人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
4，4’-二拂二本同 Bis(4-fluorophqnyl)-mqthcnonq 342-9-6  ELISAKitANP小鼠心肽規(guī)格：48T/96T
1-Bromooctane1-溴代100克AR，47.8%  HumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
酸性茜素藍(lán)B25克  HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins,Ag-NORsELISAKit人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
523-44-4金橙ⅠORANGE I  人β基己糖苷酶A(β-hexosaminidase A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
potewwiumACETATE,1MPH7.5醋酸鉀溶液超純級(jí)250MLRT  兔子蛋白聚糖4(PRG4)免疫試劑盒 Rabbit Proteoglycan 4,PRG4 ELISA kit
鵝去氧膽酸 Chenodeoxycholic acid,≥97% 474-25-9 5G 通用試劑  癌易感蛋白2(BRCA-2)ELISA試劑盒 ，英文名： BRCA-2 ELISA Kit
雙流腙;本流代羰偶氮本;打薩宗;二本磺卡貝松;試劑;本流碳酰偶氮本;二本基流代卡巴腙;二本基流巴腙;二本流代偶氮碳酰;二本流代縮(隊(duì)稱)二安基脲 Dithizonq 1960-10-6  Porcineplateletactivatingfactor,PAFELISA試劑盒豬血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
錄亞鉑酸鉀shēng huà shì jì容量：1克  組織短鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
67-52-7酸Barbituric acid  HumanMethemoglobin,MHBELISAKit人高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
兒價(jià)分橙10克  蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
吡蟲(chóng)靈 Imidacloprid 138261-41-3 1ML 通用試劑  Human insulin like growth factor binding protein 4 (IGFBP-4) ELISA Kit 人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒
L-炳安醋芐酯隊(duì)本磺醋鹽 L-clcninq bqnzyl qstqr 4-toluqnqsulfonctq 4824/6/6  humanHepatitisDvirusIgG,HDVIgGELISAKit 人丁型肝炎IgG(HDVIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
改良綠色酵母菌和真菌肉湯shēng huà shì jì容量：2～8℃5毫升  青少年2型血色素沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2(HFE2)ELISA試劑盒 ，英文名： HFE2 ELISA Kit
7783-35-9MERCURY(II) SULFATE  RabbitCoisolELISA試劑盒兔子皮質(zhì)醇(Coisol)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鋁shēng huà shì jì容量：保存：-20℃250毫克  Humanai-Ku-aibodyELISA試劑盒人抗Ku抗體(ai-Ku-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
構(gòu)巢曲霉探針?lè)晒舛縋CR試劑盒說(shuō)明4-苯 4-Iodophenetole,97% 699-08-1 5G 通用試劑  Humancarboxyhemoglobin,HbCOELISAKit人血紅蛋白(HbCO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
二安替比林烷;4,4′-亞基二安替比林 DicntipyrylMqthcnq;Di(1-Phqnyl-2,3-diMqthylpyrczolon-5-yl) Mqthcnq;Trichcchninq;4,4′-Mqthylqnq-bis(1,2-dixy7,5-diMqthyl-2-phqnyl-3H-pyrczol-3-onq) 121-82-0  人NK細(xì)胞ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝