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人腎系膜組織提取物【Human Kidney : Normal Glomerular Mesangial Derivatives】

人腎系膜組織主要功能有：(1)組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分。(2)在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子。(3)受損后影響系膜細胞和上皮細胞，進而影響腎臟病變。公司科技提供來自新鮮或冷凍人腎系膜組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法；

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項；

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

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Ergosterol glucoside  中文名：麥角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O6  度：97.5%  兔血清總補體(CH50)ELISA試劑盒  

Phyperunolide E  中文名：  分子式：C28H40O9  度：98.0%  兔血清(NO)ELISA試劑盒  

Withanolide C  中文名：醉茄內(nèi)酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒           

Physapruin A  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  兔血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1   英文名稱：   Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LOX-1

4β-Hydroxywithanolide E  中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E  分子式：C28H38O8  度：98.0%  兔脂氧合酶同工酶   英文名稱：   Rabbit Lipoxygenase Isozymes   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LOXI
瑞舒伐他汀/羅蘇伐他汀游離酸  Rosuvastatin  質(zhì)量規(guī)格：>97%,游離酸 大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)試劑盒 Rat Chorionic Gonadoophin β,β-CG ELISA Kit

蘇丹I/溶劑黃14  Sudan I/Solvent Yellow 14  質(zhì)量規(guī)格：BS生物染色級 大鼠溶質(zhì)載體家族2(易化葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白),成員2(SLC2A2)試劑盒 Rat Sole carrier family 2,facilitated glucose anspoer member 2,SLC2A2 ELISA kit

蘇丹II/蘇丹2/溶劑橙7  Sudan II /Solvent Orange 7  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CACT)試劑盒 Rat carnitine-acylcarnitine anslocase,CACT ELISA Kit

蘇丹Ⅲ/蘇III/溶劑紅23  Sudan3  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠肉堿試劑盒 Rat Total Carnitine ELISA Kit

蘇丹Ⅳ/蘇4/溶劑紅24  Sudan IV/Solvent Red 24  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-Ⅰ(CPT1)試劑盒 Rat Carnitine palmitoylansferase I,CPT1 ELISA kit

油紅O/溶劑紅27/蘇5B  Oil red O/Solvent Red 27   質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA檢測試劑盒RatLactoferrin,LTF/LFELISAkit 96T/48T

蘇G/溶劑紅1/油紅113  Sudan red G/Solvent Red 1  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)試劑盒 Rat Lactoferrin,LTF/LF ELISA kit

/溶劑黑3  Sudan Black B /Solvent Black 3  質(zhì)量規(guī)格：BS(生物染色) 大鼠軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)試劑盒 Rat cailage oligomeric maix protein,COMP ELISA Kit

蘇B  Sudan Red B/Solvent Red 25  質(zhì)量規(guī)格：AR 大鼠*腺原氨酸(T3)抗體試劑盒 Rat i-iodothyronine(T3)aibody ELISA kit

蘇7B/溶劑紅19/脂肪紅7B  Sudan Red 7B/Solvent Red 19  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠*狀腺原氨酸(T3)ELISA檢測試劑盒Rati-iodothyronine,T3ELISAKit 96T/48T
人腎系膜組織提取物培養(yǎng)兔內(nèi)皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISAkit     4-Aminobutyric acid  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2  度：98.0%

兔內(nèi)皮細胞生長因子elisa試劑盒   兔內(nèi)皮細胞生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔內(nèi)皮細胞生長因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔內(nèi)皮細胞生長因子試劑盒、兔內(nèi)皮細胞生長因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  5-Benzyloxyindole  中文名：5-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO  度：98.0%

兔內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒     5-Benzyl-1H-tetrazole  中文名：5-芐基-1H-四唑  分子式：C8H8N4O  度：98.0%

兔內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISAKit                 6-Hydroxyrubiadin  中文名：6-羥基甲基異茜草素  分子式：C15H10O5 

兔內(nèi)皮生長因子(rabbit VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile  147619-40-7  中文名：  分子式：C7H5ClN2O2

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。