小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物【Mouse Intestine: Normal Small Intestinal Smooth Muscle Cell Derivatives】

小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物是從小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取的，小鼠小腸平滑肌細(xì)胞從正常小鼠小腸組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

病毒核酸四重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒Tα-Spinasterol glucoside17456α-菠甾醇葡萄糖苷

甲型H1N1亞型/季節(jié)性H3亞型/Victoria系/Yamagata系人類流感病毒四重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒Tα-Spinasterol acetate46516α-菠甾醇乙酸酯

甲型/乙型/甲型H1N1亞型/季節(jié)性H3亞型人類流感病毒四重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒Tα-Lipoic acid778α-硫辛酸

ABT9+7 呼吸道病毒多重PCR快速檢測(cè)試劑盒Tα-Lapachone473

肺炎鏈球菌多重PCR血清分型檢測(cè)試劑盒Tα-D-Glucose4922α-D-葡萄糖
Mesterolone  1424-00-6  中文名：甲氫睪酮  分子式：C20H32O2    人轉(zhuǎn)移因子(TF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human TF (ansfer Factor) ELISA Kit

Testosterone undecanoate  5949-44-0  中文名：十一酸睪酮  分子式：C30H48O3    人轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TNPO1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human TNPO1 (anspoin 1) ELISA Kit               

4-Chlorodehydromethyltestosterone  2446-23-3  中文名：4-氯去氫甲基睪酮  分子式：C20H27ClO2    人轉(zhuǎn)鐵蛋白（F）ELISA試劑盒  

Cholesterol  57-88-5  中文名：膽固醇  分子式：C27H46O    人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)ELISA試劑盒  

Mefenamic acid  61-68-7  中文名：甲滅酸  分子式：C15H15NO2    人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(T)ELISA試劑盒
鹽酸克林霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Clindamycin HCl  質(zhì)量規(guī)格：>800μg/mg,含量測(cè)定 冰凍切片組織CASPASE-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

鹽酸維拉帕米  Verapamil HCl  質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 冰凍切片組織CASPASE-4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

鹽酸維拉帕米（標(biāo)準(zhǔn)品）  Verapamil HCl  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片組織CASPASE-5蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

霉酚酸; 麥考酚酸;MPA  Mycophenolic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 冰凍切片組織CASPASE-6蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

霉酚酸; 麥考酚酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Mycophenolic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片組織CASPASE-7蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

阿莫西林/羥氨芐青霉素  Amoxicillin   質(zhì)量規(guī)格：BR級(jí)，可用于細(xì)胞培養(yǎng)，度99%以上,三水合物,USP30 冰凍切片組織CASPASE-8蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

阿莫西林（標(biāo)準(zhǔn)品）  Amoxicillin   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 冰凍切片組織CASPASE-9蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

非諾貝特  Fenofibrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP6.0 冰凍切片組織CDK2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

非諾貝特（標(biāo)準(zhǔn)品）  Fenofibrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片組織CDK3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

丙磺舒  Probenecid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 冰凍切片組織CDK4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20
小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物說(shuō)明書蠶多巴胺   英文名稱：   Bombyx Dopamine   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DPA  Methyl β-D-fructofuranoside  中文名：甲基-β-D-果糖苷  分子式：C7H14O6 

菜豆凝集素elisa試劑盒   菜豆凝集素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   菜豆凝集素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：菜豆凝集素試劑盒、菜豆凝集素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  4-Chlorodehydromethyltestosterone  2446-23-3  中文名：4-氯去氫甲基睪酮  分子式：C20H27ClO2 

補(bǔ)體C4測(cè)定試劑盒（比濁法）                    Rifampicin  13292-46-1  中文名：利福平  分子式：C43H58N4O12 

表皮生長(zhǎng)因子受體   英文名稱：   epidermal growth factor receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EGFR  3β,5α,9α-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  中文名：  分子式：C28H44O4  度：97.0%

表皮生長(zhǎng)因子受體   英文名稱：   epidermal growth factor receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EGFR  3β,5α,9α-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  中文名：  分子式：C28H44O4

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。