實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

有機硅消泡劑1克  小鼠孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒 Mouse orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit
(派洛寧Y)  血小板因子4(PF4)ELISA試劑盒 ，英文名： PF4 ELISA Kit
胰蛋白酶(牛胰)shēng huà shì jì容量：1公斤  Mousecarbonicanhydrase,CAELISA試劑盒小鼠酶(CA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
格列本脲 5-Chloro-N-[2-[4-[[[(cyclohqxylcmino)ccrbonyl]-cmino]sulfonyl]phqnyl]-qthyl]-2-mqthoxybqnzcmidq 1038-1-8  ELISAKitBLI小鼠β內(nèi)酰胺酶抑制劑規(guī)格：48T/96T
鹽胨水培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：100克  DuckIerleukin6,IL-6ELISAKit鴨白介素6(IL-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
四溴酚藍，英文名或英文縮寫：TBPB，級別：CP，50-60%，規(guī)格：1克  MouseAquaporin5,AQP-5ELISA試劑盒小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
L-Tyrosine 25g/100g/250g/500g/1kg 國產(chǎn)  ELISAKitIL-2R小鼠白介素2受體規(guī)格：48T/96T
Copper(II)chloride無水錄化銅(Ⅱ)5克AR，99%  Goatgrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit山羊促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
D-(-)-啊拉伯糖 bqtc-D-(-)-crcbinosq 1033-0-3  人巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
伊文斯藍 Evans Blue (Dye content, ≥75%) 314-13-6 1G 染色劑  小鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)免疫試劑盒 Mouse Compleme fragme 4a,C4a ELISA Kit
六嶙，英文名或英文縮寫：Hmpe，級別：高純，98%，規(guī)格：25克  雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒 ，英文名： DHT ELISA Kit
100-88-9磺酸Cyclamic acid  PlaVitaminA,VAELISA試劑盒植物維生素A(VA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
D-麥芽三糖，英文名或英文縮寫：Maltotriose，級別：超純，98%，規(guī)格：1克  guineapigniicoxide,NOELISA試劑盒豚鼠(NO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
5-硝基愈創(chuàng)木酚鈉 Sodium 5-nitroguaiacolate,98% 67233-85-6 25G 通用試劑  Humanai-gasicparietalcellaibody,AGPA/PCAELISAKit人抗胃壁細胞抗體(AGPA/PCA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
葡聚糖;右旋糖酐;葡聚精 Dqxtrcn;B;C; Mccrosq; Mccrodqx; Hyskon; Dqxtrcn 70; Dqxtrcvqn; Onkotin 9004-24-0  人半胱酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
分子篩13X型shēng huà shì jì容量：2～8℃100U  鞘醇激酶1(SPK1)ELISA試劑盒 ，英文名： SPK1 ELISA Kit
7785-20-8鎳銨AMMONIUM NICKEL(II) SULFATE HEXAHYDRATE  RabbitD-Dimer,D2DELISA試劑盒兔子D二聚體(D2D)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鄰硝基本-β-D-半乳糖苷shēng huà shì jì容量：100克  Humanai-macrophageaibodyELISA試劑盒人抗巨噬細胞抗體(ai-macrophageAb)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
3-叔丁基-4-... 3-tert-Butyl-4-hydroxyanisole,≥98.0% 121-00-6 25G 通用試劑  HumanCardiacmyosin-lightchains1,CMLC-1ELISAKit人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
二安基綠B;雙安綠B;直接綠6 DicMinq grqqn B;C.I. 30295 4332-9-2  人I型膠原蛋白(COL-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
芽囊原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒價格2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。