實(shí)時熒光定量PCR：

實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

熒光化學(xué)物質(zhì)：
實(shí)時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報(bào)告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。

溴紫葡萄糖肉湯25克  藍(lán)色熒光染色體核型分析試劑盒100次

517-23-72-乙酰丁內(nèi)酯2-Acetylbutyrolactone  ELISAKitFⅢ人凝血因子Ⅲ規(guī)格：48T/96T

硅藻土載體shēng huà shì jì容量：2～8℃1克  小鼠V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因同源物(FOS)ELISA試劑盒 ，英文名： FOS ELISA Kit

2,3-丁二同;雙酰;聯(lián)?；?/span>;二基二同;二二酰 2,3-Butcnqdionq;DiMqthyl dikqtonq;2,3-Dikqtobutcnq;Biccqtyl;DiMqthyl glyoxcl 431-03-8  人血管活性肽酶抑制劑(VPI)ELISA檢測試劑盒Humanvasopeptidaseinhibitors,VPIELISAKit 96T/48T

叔丁醇shēng huà shì jì容量：0.5毫升  大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)免疫試劑盒 Rat Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit
白，英文名或英文縮寫：Lead(II)caonate，級別：CP，95%，規(guī)格：100克  HumanEndostatin，ESELISAKit人內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

n-Dodecyl-β-D-Maltopyranoside 250mg/1g/5g INALCO原裝  人糖基化終末產(chǎn)物(AGE)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

SULFATEANxy7noUS,無水美國藥典級500G7487-88-9RT  豬β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)免疫試劑盒 Pig β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit

三氧化二硼 Boron oxidq 1303-86-  Humankeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 人角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CalciumLactateL-乳酸鈣150UBR，98%  Humanpancreatickininogenase,PKELISA試劑盒人胰激肽原酶(PK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
間甲基紅shēng huà shì jì容量：100克  Human gasin releasing peptide (GRP) ELISA Kit 人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒

84-77-5鄰本二二癸酯;本二二正癸酯;鄰酞酸二正癸酯Didecyl phthalate;Di-n-decyl-o-phthalate;Convoil-20;DDP  Humanadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit 人能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

熬和樹脂200IU  Humancostimulatorymoleculesrecptor,CMRELISA試劑盒人協(xié)同刺激分子受體(CMR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

長春堿衍生物 Conophylline(HPLC,≥98%) 142741-24-0 5MG 通用試劑  組織CLK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

L-脯安醋 L(-)-Prolinq, 99+% 147-82-3  HumanProteinkinaseA,PKAELISAKit人蛋白激酶A(PKA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
雪腐鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明芐西林鈉，英文名或英文縮寫：Ampicillin wo7ium salt，級別：BR，150u/mg，規(guī)格：150ku  小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員11A(TNFRSF11A/RANK)免疫試劑盒 Mouse Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A,TNFRSF11A ELISA kit

Cetrimide瓊脂基礎(chǔ)NA  傳染性胸膜肺炎(APP)核酸檢測試劑盒(-PCR法) 48T

GalNAc1-β-PNP4-硝基本-N-乙酰-β-D-基半乳糖苷250克BR，98%  HumanPlaceaCadherin,P-cadELISA試劑盒人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

二縮水甘油迷;二環(huán)氧甘油迷 1,4-Butcnqdiol diglycidyl qtqr; 42-79-8  ELISAKitIFN-β/IFNB豬β干擾素規(guī)格：48T/96T

溴東莨菪減 MqthscopolcMinq BroMidq 122-41-9  Humancytokeratin20，CK20ELISAKit人細(xì)胞角蛋白20(CK20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

熒光定量PCR服務(wù)：

公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)