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人體食管癌組織提取物【Cancer: Human Esophageal Cancer Derivatives】

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，按組織學(xué)可以分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌和未分化癌三種。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍人體食管癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法；

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)；

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀(guān)察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

RuBP 1,5-二磷酸核酮糖   mgEnrofloxacin936-恩諾沙星

Safranin O 番紅O；藏紅T   5gMequindox132977乙酰甲喹

SDS 十二烷基硫酸鈉   0g/2g/0gSulfamonomethoxine123磺胺間甲氧嘧啶

Silwet L7   ml /ml Sulfamonomethoxine 3068磺胺間甲氧嘧啶鈉

Skim Milk 脫脂奶粉   gLincomycin1541林可霉素
Empagliflozin  864070-44-0  中文名：依帕列凈  分子式：C23H27ClO7  度：95.0%      大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISAKit  

Emodin  518-82-1  中文名：大黃素  分子式：C15H10O5  度：99.0%  關(guān)鍵詞：  抗菌; 抗腫瘤; 導(dǎo)瀉; 酸模屬; 大黃屬; 決明屬; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠抗核抗體(ANA)ELISAKit  

Eleutheroside C  15486-24-5  中文名：  分子式：C8H16O6  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)ELISAKit              

Edaravone  89-25-8  中文名：依達(dá)拉奉  分子式：C10H10N2O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠上腺髓質(zhì)素elisa試劑盒   小鼠上腺髓質(zhì)素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠上腺髓質(zhì)素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠上腺髓質(zhì)素試劑盒、小鼠上腺髓質(zhì)素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Echinoynethiophene A  64165-98-6  中文名：  分子式：C13H10O2S  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  華東藍(lán)刺頭; 闊苞菊; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠上腺素elisa試劑盒   小鼠上腺素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠上腺素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠上腺素試劑盒、小鼠上腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
人參二醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Panaxadiol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌肌酸激酶(CKM)ELISA試劑盒 ，英文名： CKM ELISA Kit

人參三醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Panaxatriol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌腱蛋白X(TNX)ELISA試劑盒 ，英文名： TNX ELISA Kit

人參皂苷CK(標(biāo)準(zhǔn)品)  Compound K  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌侵蛋白(MTPN)ELISA試劑盒 ，英文名： MTPN ELISA Kit

人參皂苷F1(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ginsenoside F1  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人參皂苷F2(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ginsenoside F2  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒 ，英文名： MYS ELISA Kit

人參皂苷Rb1(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ginsenoside Rb1  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌球蛋白ⅠA(MYO1A)ELISA試劑盒 ，英文名： MYO1A ELISA Kit

人參皂苷Rb2（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ginsenoside Rb2  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌球蛋白ⅤA(MYO5A)ELISA試劑盒 ，英文名： MYO5A ELISA Kit

人參皂苷Rb3(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ginsenoside Rb3  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌球蛋白重鏈(MHC)ELISA試劑盒 ，英文名： MHC ELISA Kit

人參皂苷Rc(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ginsenoside Rc  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌球蛋白重鏈1(MYH1)ELISA試劑盒 ，英文名： MYH1 ELISA Kit

人參皂苷Rd(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ginsenoside Rd  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌球蛋白重鏈2(MYH2)ELISA試劑盒 ，英文名： MYH2 ELISA Kit
人體食管癌組織提取物說(shuō)明書(shū)兔透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒     5-Benzyl L-glutamate  中文名：L-谷氨酸5-芐酯  分子式：C12H15NO4  度：98.0%

兔銅藍(lán)蛋白(CP)ELISA試劑盒              5-Benzyl L-glutamate  中文名：L-谷氨酸5-芐酯  分子式：C12H15NO4 

兔糖化血紅蛋白A1celisa試劑盒   兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒、兔糖化血紅蛋白A1c elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6  度：98.0%

兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISAKit                 4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  中文名：  分子式：C14H10BrN 

兔胎盤(pán)生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   兔胎盤(pán)生長(zhǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔胎盤(pán)生長(zhǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔胎盤(pán)生長(zhǎng)因子試劑盒、兔胎盤(pán)生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6

注意事項(xiàng)；

1. 接收到，肉眼觀(guān)察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。