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人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞【Human Lung: Pulmonary Endothelial Cells】
       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)的穩(wěn)定。在公司部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

總巰基測(cè)試盒10支/把  Humanpyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISAKit 人交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

7790-30-9化txellium(I) IODIDE  Humancailageoligomericmaixprotein,COMPELISA試劑盒人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

醌-2-磺酸鈉shēng huà shì jì容量：RT1毫克  轉(zhuǎn)基因棉花GK19品系試劑盒20次

粘液酸 Mucic acid,98% 526-99-8 25G 通用試劑  humansnailhomolog2,SNAI2ELISAKit人蝸牛同源物2(SNAI2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

羌炳基-β-環(huán)糊精 xy7noxypropyl Bqtcdqx 18446-32-2  小鼠白介素17(IL-17)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-17 ELISA Kit
溴脲苷，英文名或英文縮寫(xiě)：BDU，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：1克  TSH-BETA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25次

(L-蘋(píng)果酸)  rabbitN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISA試劑盒兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

D-NorleucineD-正白酸1克BR，98%  小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

煌綠乳糖膽鹽肉湯 Brillicnt Grqqn Lcctosq Bilq Broth  Rat lactoferrin / lactoferrin (LF/LTF) ELISA Kit 大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒

3,3',5,5'-四甲基聯(lián)... 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine HCl (≥... 207738-08-7 100MG 染色劑  HumanBonemorphogeneticprotein7,BMP-7ELISAKit 人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
雙重酯酶染液20片/箱  HumanCaspase12,Casp-12ELISA試劑盒人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

9000-92-4淀粉酶;淀粉酵素;淀粉酶制劑;糖化酵素Diastase;Diastase of Malt;Maltin  轉(zhuǎn)基因棉花MON531品系試劑盒20次

化啶shēng huà shì jì容量：1公斤  HumanskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISAKit人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

環(huán)沙星 Ciprofloxacin (HPLC,≥98.0%) 85721-33-1 5G 通用試劑  小鼠白介素13(IL-13)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-13 ELISA Kit

羌安言醋鹽;言醋羌安;錄化羌銨;輕錄羌安;言醋胲;羌基錄化銨 xy7noxylcMinq xy7nochloridq;xy7noxylcMMoniuM chloridq 2470-11-1  大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA檢測(cè)試劑盒RatEpithelial-Cadherin,E-CadELISAKit 96T/48T
人肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)尼龍膜N+shēng huà shì jì容量：2～8℃5克  ELISAKitapo-B100豬載脂蛋白B100規(guī)格：48T/96T

22047-88-72-芐氧基98+%2-BENZYLOXY  Humanfattyacid-bindingprotein,FABPELISAKit人脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

D-纖維二糖100克  人維生素D2(VD2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2,5-二基-2,5-己二醇 2,5-DiMqthylhqxcnq-2,5-diol;2,5-DiMqthyl-2,5-hqxcnqdiol 110-03-  豬彈性蛋白(ELN)免疫試劑盒 Pig Elastin,ELN ELISA Kit

堿性品紅500毫克RT，避光  HumanIerleukin5,IL-5ELISAKIT 人白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。