小鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取物【Mouse Airway: Normal Bronchial Fibroblast Derivatives】

 小鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取物是從小鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取的，小鼠支氣管成纖維細(xì)胞從正常小鼠支氣管組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

感H7N7病毒雙重?zé)晒?/span>PCR 檢測(cè)試劑盒485,6-Dihydro-methylH-thieno[2,3-b]thiopyran-one14869

感H9病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Dorzolomide hydrochloride16932鹽酸多佐胺

感H9N1病毒雙重?zé)晒?/span>PCR 檢測(cè)試劑盒48Isoprenaline hydrochloride5鹽酸異丙

感H9N2病毒雙重?zé)晒?/span>PCR 檢測(cè)試劑盒48Quetiapine fumarate1119742富馬酸喹硫平

流感病毒N1型單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Pramipexole dihydrochloride46325鹽酸普拉克索
Mefenamic acid  中文名：甲滅酸  分子式：C15H15NO2    豬脂蛋白α(Lp-α)ELISAKit              

Medetomidine hydrochloride  中文名：鹽酸美托咪啶  分子式：C13H17ClN2    豬補(bǔ)體蛋白3elisa試劑盒   豬補(bǔ)體蛋白3試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬補(bǔ)體蛋白3試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬補(bǔ)體蛋白3試劑盒、豬補(bǔ)體蛋白3eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Mecobalamin  中文名：甲鈷胺  分子式：C63H91CoN13O14P    豬表皮生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   豬表皮生長(zhǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬表皮生長(zhǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬表皮生長(zhǎng)因子試劑盒、豬表皮生長(zhǎng)因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Meclizine hydrochloride  中文名：鹽酸美克洛嗪  分子式：C25H29Cl3N2    豬白血病抑制因子受體elisa試劑盒   豬白血病抑制因子受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬白血病抑制因子受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬白血病抑制因子受體試劑盒、豬白血病抑制因子受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Mebendazole  中文名：甲苯咪唑  分子式：C16H13N3O3    豬白細(xì)胞介素15elisa試劑盒   豬白細(xì)胞介素15試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬白細(xì)胞介素15試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬白細(xì)胞介素15試劑盒、豬白細(xì)胞介素15eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
鹽酸番茄堿 HPLC≥98% 20mg RatCiliaryNeuroophicFactor,CFELISAKit大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

表戈米辛O HPLC≥98% 20mg RatCiliaryNeuroophicFactor,CFELISA試劑盒大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

異鼠李素O槐二糖O鼠李糖苷 HPLC≥95% 20mg Ratc-junELISAKit大鼠c-junELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

山柰酚槐二糖鼠李糖苷 HPLC≥95% 20mg Ratc-junELISA試劑盒大鼠c-junELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

槲皮素O葡萄糖O鼠李糖苷 HPLC≥98% 20mg Ratc-JunN-terminalkinases,JNKELISAKit大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

異鼠李素O葡萄糖O鼠李糖苷 HPLC≥95% 20mg Ratc-JunN-terminalkinases,JNKELISA試劑盒大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

靈芝酸I HPLC≥98% 20mg RatClaracellprotein,CC16ELISAKit大鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

黃卡瓦胡椒素C HPLC≥95% 20mg RatClaracellprotein,CC16ELISA試劑盒大鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

β靈芝酸M HPLC≥95% 20mg RatClusterin,CLUELISAKit大鼠凝聚素(CLU)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

靈芝內(nèi)酯B HPLC≥98% 20mg RatClusterin,CLUELISA試劑盒大鼠凝聚素(CLU)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠支氣管成纖維細(xì)胞提取物促紅細(xì)胞生成素 (EPO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   德國(guó) DRG     3-tert-Butoxycarbony-2-(4-anisyl)-4-phenyl-5-oxazolidinecarboxylic acid  中文名：  分子式：C22H25NO6 

促紅細(xì)胞生成素 (EPO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  3β-Acetoxy-5α-androstan-17β-ol  3090-70-8  中文名：3-乙?；?/span>-5α-雄烷二醇  分子式：C21H34O3 

雌三醇 (E3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Nicorandil  65141-46-0  中文名：尼可地爾  分子式：C8H9N3O4 

醇脫氫酶（ADH）試劑盒   紫外分光光度法    50管/48樣  Vilazodone hydrochloride  中文名：鹽酸維拉唑酮  分子式：C26H28ClN5O2 

傳染性胃腸炎病毒(PTGV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Sitostenone  中文名：豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。