人呼吸道上皮細(xì)胞提取物【Human Airway: Normal Airway Epithelial Cell Derivatives】

人呼吸道上皮細(xì)胞提取物是從人原代呼吸道上皮細(xì)胞提取的，人原代呼吸道上皮細(xì)胞從正常人呼吸道上皮組織制備。正常人呼吸道上皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

豬藍(lán)耳PRRS抗體快速檢測(cè)卡N-Acetylsulfanilyl chloride121-對(duì)乙酰胺基

豬口蹄疫FMDV抗體快速檢測(cè)卡Exemestane786依西美坦

豬流行性腹瀉PED抗體快速檢測(cè)卡Hemapolin426甲基環(huán)硫雄醇中間體 E

口蹄疫O型抗體快速檢測(cè)卡Formestane5668福美司坦

豬流感抗體快速檢測(cè)卡4-Chlorotestosterone acetate8559醋酸氯睪酮
Periplogenin  中文名：杠柳苷元  分子式：C23H34O5  度：98.0%  兔糖化血紅蛋白A1celisa試劑盒   兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒、兔糖化血紅蛋白A1c elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Periplocogenin  中文名：  分子式：C28H42O6  度：98.0%  兔胎盤生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   兔胎盤生長(zhǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔胎盤生長(zhǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔胎盤生長(zhǎng)因子試劑盒、兔胎盤生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Wallicoside  中文名：斷節(jié)參苷  分子式：C61H98O26  度：98.0%  兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒  

Periplocoside N  中文名：  分子式：C27H44O6  度：98.0%  兔細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）ELISA試劑盒  

Trillin  中文名：延齡草苷  分子式：C33H52O8  度：99.0%  兔透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒
脂酰布洛芬-β-D-葡萄糖苷酸  Ibuprofen Acyl-β-D-glucuronide   質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MousemajorhistocompatibilitycomplexELISAKit小鼠組織相容性復(fù)合物(MHC)規(guī)格：96T/48T

外消旋2-羥基布洛芬  rac 2-Hydroxy Ibuprofen  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MouseMBPELISAKit小鼠髓0脂堿蛋白(MBP)規(guī)格：96T/48T

1-羥基布洛芬(布洛芬雜質(zhì)))(非對(duì)映)  1-Hydroxy Ibuprofen (Ibuprofen Impurity L)(Mixture of Diastereomers)  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MouseMD2ELISAKit小鼠髓樣分化蛋白-2(MD2)規(guī)格：96T/48T

1-含氧的布洛芬  1-Oxo Ibuprofen  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MouseMGα1ELISAKit小鼠α1微球蛋白(MGα1)規(guī)格：96T/48T

羧酸布洛芬(非對(duì)映)  Ibuprofen Carboxylic Acid(Mixture of Diastereomers)  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MouseMGβ2ELISAKit小鼠β2微球蛋白(MGβ2)規(guī)格：96T/48T

外消旋α-羥基布洛芬  rac α-Hydroxy Ibuprofen  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MousemicroalbunminuriaELISAKIT小鼠微量白蛋白尿(ALB)規(guī)格：96T/48T

(R)-布洛芬  (R)-Ibuprofen  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MouseMotilinELISAKit小鼠胃動(dòng)素(MTL)規(guī)格：96T/48T

(S)-布洛芬  (S)-Ibuprofen  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MouseNF-kBELISAKit小鼠NF-kB規(guī)格：96T/48T

依那普利  Enalapril  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MouseniicoxidesyhaseELISAKIT小鼠合成酶(NOS)規(guī)格：96T/48T

1,3-二芐基-5-氟尿嘧啶  1,3-Dibenzyl-5-fluorouracil  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱MouseNN-T4ELISAKit小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)規(guī)格：96T/48T
人呼吸道上皮細(xì)胞提取物Sitostenone  1058-61-3  中文名：豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O  度：96.0%  關(guān)鍵詞：  蘇里南苦木; 火炬松; 豆甾烷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒           

Sitagliptin phosphate  654671-78-0  中文名：無水磷酸西他列汀  分子式：C16H18F6N5O5P  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠牙本質(zhì)涎0蛋白   英文名稱：   Mouse Dein Sialophosphoprotein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DSP

Sitafloxacin  127254-12-0  中文名：西他沙星  分子式：C19H18ClF2N3O3  度：98.5%      小鼠DNA抗體   英文名稱：   Mouse Deoxyribonucleic Acid Aibody   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DNA.Ab

Silodosin  160970-54-7  中文名：西洛多辛  分子式：C25H32F3N3O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠氧化酶   英文名稱：   Mouse Diamine Oxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DAO

   171599-83-0  中文名：枸櫞酸  分子式：C28H38N6O11S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠多巴胺受體D1   英文名稱：   Mouse Dopamine receptor D1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DRD1