小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Mouse Lung: Normal Artery Endothelial Cell Derivatives】

小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取的，小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞從正常小鼠肺大動脈組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

偏肺病毒/腺病毒雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Manidipine dihydrochloride892265鹽酸馬尼地平

新雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Quetiapine1119749喹硫平

博卡（Boca）/呼吸道合胞（RSV）/偏肺（MPV）病毒三重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Gemcitabine9581吉西他濱

冠狀（Hcov）/副流感（PIV）/腺（ADV）病毒三重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Mizolastine86125咪唑司汀

乙型流感病毒（IFVB-YA）分型單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Avanafil37847阿伐那非
Marsdenoside F  中文名：  分子式：C39H60O14  度：%  兔固（ALD）ELISA試劑盒  

8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione  中文名：  分子式：C28H40O3  度：%  兔去甲上腺素(NA)ELISA試劑盒           

Schleicheol 1  中文名：  分子式：C30H52O2  度：%  兔去甲上腺素elisa試劑盒   兔去甲上腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔去甲上腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔去甲上腺素試劑盒、兔去甲上腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Uzarigenin digitaloside  中文名：  分子式：C30H46O8  度：97.5%  兔前列腺素F2aelisa試劑盒   兔前列腺素F2a試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔前列腺素F2a試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔前列腺素F2a試劑盒、兔前列腺素F2a elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Daturametelin I  中文名：  分子式：C34H48O10  度：93.0%  兔前列腺素E2elisa試劑盒   兔前列腺素E2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔前列腺素E2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔前列腺素E2試劑盒、兔前列腺素E2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
鹽酸達(dá)克羅寧（標(biāo)準(zhǔn)品）  Dyclonine hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠內(nèi)皮細(xì)胞TEK酪酸激酶(Tie2)ELISA試劑盒 ，英文名： Tie2 ELISA Kit

SGI-1027  SGI1027  質(zhì)量規(guī)格：>98%,DNMT抑制劑 小鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 ，英文名： eNOS ELISA Kit

鹽酸己新（標(biāo)準(zhǔn)品）  Bromhexine HCl  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA檢測試劑盒MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 96T/48T

雷西莫特  R848,Resiquimod  質(zhì)量規(guī)格：>98%,TLR7/TLR8激動劑 小鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒 ，英文名： eNOS-3 ELISA Kit

羥甲煙胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  N-(Hydroxymethyl)nicotinamide  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠內(nèi)皮型合酶(eNOS)ELISA試劑盒 ，英文名： eNOS ELISA Kit

對氨基水楊酸異（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pasiniazid  質(zhì)量規(guī)格：UV法溶出度檢查 小鼠內(nèi)皮型合酶(NOS3)ELISA試劑盒 ，英文名： NOS3 ELISA Kit

曲匹布通（標(biāo)準(zhǔn)品）  Trepibutone  質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測定 小鼠內(nèi)皮型合酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒 ，英文名： eNOS-3 ELISA Kit

曲匹地爾（標(biāo)準(zhǔn)品）  Trapidil  質(zhì)量規(guī)格：供鑒別用 小鼠內(nèi)皮抑素(ES)ELISA檢測試劑盒MouseEndostatin,ESELISAKit 96T/48T

桂美酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  CINAMETIC ACID  質(zhì)量規(guī)格：溶出度檢查 小鼠內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒 ，英文名： ES ELISA Kit

奧拉米特（標(biāo)準(zhǔn)品）  Orazamide  質(zhì)量規(guī)格：UV法溶出度檢查 小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒 ，英文名： EL ELISA Kit
小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物大鼠疊氮胸苷(AZT)ELISAKit                 Tofacitinib   540737-29-9  中文名：枸櫞酸托法替尼  分子式：C22H28N6O8 

大鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISAKit     Toltrazuril  中文名：托曲珠利  分子式：C18H14F3N3O4S 

大鼠雌激素受體(ER)ELISAKit                 Tiotropium bromide  136310-93-5  中文名：噻托溴銨  分子式：C19H22NO4S2 

大鼠補體片斷5a(C5a)ELISAKit                 Tokinolide B  112966-16-2  中文名：  分子式：C24H28O4 

大鼠補體蛋白3(C3)ELISAKit     Tofacitinib   540737-29-9  中文名：枸櫞酸托法替尼  分子式：C22H28N6O8  度：98.0%

 運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。