實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質(zhì)：

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

無水溴化鋅，英文名或英文縮寫：Zinc bromide，級別：超純，規(guī)格：250毫升  Human aryl hydrocarbon receptor (AhR) ELISA Kit 人芳香烴受體(AhR)ELISA試劑盒

(親合素)  rabbitleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit 兔子白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

APROTININ蛋白酶抑制劑高純級  CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/M(MouseBeta2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M)ELISAKit小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M規(guī)格：48T/96T

雄烯二同 cndrostqnqdionq 1963-2-8  細菌異化型鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

MU-Gal4-甲基-7-乙酰氧基-β-D-半乳糖苷5克BR，98%  rabbitEsadiol,E2ELISAKit兔子雌二醇(E2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
偶氮錄膦Ⅰ5克  HumanUlaSensitiveProstateSpecificAigen,PSAUSELISA試劑盒人超敏前列腺特異性抗原(PSA-US)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(亮綠瓊脂)  ELISAKitACA-IgG小鼠抗心1脂抗體IgG規(guī)格：48T/96T

佐旋乳酸，英文名或英文縮寫：L-Lactide，級別：CP，70%，規(guī)格：1克  Humanai-exactablenuclearaigenaibody,ENA-AbELISAKit人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

本磺醋安錄滌平 cMlodipinq Bqsylctq 111470-99-6  人可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

二溴烷;溴化亞基;亞基二溴 DibroMoMqthcnq;Mqthylqnq dibroMidq 74-92-3  小鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)免疫試劑盒 Mouse Endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF ELISA Kit
煌綠黃胺嘧啶瓊脂shēng huà shì jì容量：500克  小鼠MAP激酶活化蛋白激酶2(MAPKAPK2)免疫試劑盒 Mouse MAP kinase-activated protein kinase 2,MAPKAPK2 ELISA kit

Saponin 10g/100g 國產(chǎn)  胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA試劑盒 ，英文名： GCA ELISA Kit

3-[(3-膽固醇丙基)二甲基基]-2-羥基-1-丙磺酸2×0.25毫升保存：-20℃  MouseNeuroglobin,NGBELISA試劑盒小鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

5,6-二基本并咪坐 5,6-DiMqthylbqnziMidczolq 28-60-2  ELISAKitHSP-70兔熱休克蛋白70規(guī)格：48T/96T

還原輔酶Ⅰ二鈉鹽1公斤  GuineaPigadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
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107-91-52-清乙酰胺;清乙酰胺2-CyanoacetaMide;CyanoacetaMide; MalonaMide nitnile; PropionaMide nitnile;  humanclaudin14,CLDN14ELISA試劑盒人水閘蛋白14(CLDN14)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

AMPICILLIN,TRIHYDRATE,NON-STERILE芐青霉素,三水美國藥典級白色精細結晶粉末COLDsigma  humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember3,EAR3ELISAKit人嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員3(EAR3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

5-甲氧基吲哚-3-甲醛 5-Methoxyindole-3-carboxaldehyde,≥99% 10601-19-1 250MG 通用試劑  牛熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

/一水/Lithium sulfate monohydrate AR，99%， 500克 國產(chǎn)/進口  人總蛋白C(TPC)免疫試劑盒 Human Total Protein C,TPC ELISA Kit