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人體直腸癌組織提取物【Cancer: Human Rectum Cancer Derivatives】

直腸癌是胃腸道中常見的惡性腫瘤發(fā)病率僅次于胃和食管癌是大腸癌的常見部分（占60％左右）絕大多數(shù)病人在40歲以上30歲以下者約占15％男性較多見男女之比為2-3：1，直腸癌是一種生活方式病。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體直腸腺癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法；

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實(shí)驗事項；

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

pcomb3展示系統(tǒng)套（3組分）/盒Glyburide2381格列本脲

表達(dá)性宿主菌XL1-Blue0 ul/支Gliquidone333425格列喹酮

輔助噬菌體VCSM130 ul/支Glimepiride934797格列美脲

噬菌粒pcomb3HSSng/ul，ulGliclazide211878格列齊特

pcomb3HSS展示系統(tǒng)套（3組分）/盒Glaucogenin C mono-D-thevetoside84914
Docetaxel  114977-28-5  中文名：多西他賽  分子式：C43H53NO14    RabbitAmylinELISAKit兔胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Irinotecan hydrochloride  100286-90-6  中文名：鹽酸伊立替康  分子式：C31H35ClN4O6    豚鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒 ，英文名： IFN-γ ELISA Kit

Aminophylline  317-34-0  中文名：氨茶堿  分子式：C16H24N10O4    Human mast cell yptase (MCT) ELISA Kit 人肥大細(xì)胞類胰蛋白酶(MCT)ELISA試劑盒

Chlorhexidine acetate  56-95-1  中文名：醋酸氯己定  分子式：C26H38Cl2N10O4    rabbitThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 兔子促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Carbasalate calcium  5749-67-7  中文名：卡巴匹林鈣  分子式：C19H18CaN2O9    CLIAKitforBeta2-GP1AbIgG(HumanBeta2-Glycoprotein1AibodyIgG)ELISAKit人β2糖蛋白1抗體IgG規(guī)格：48T/96T
球松素查爾酮 HPLC≥98% 5mg rabbitadrencocoicoopichormone,ACTHELISA試劑盒兔子促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去甲布拉易林 HPLC≥98% 5mg Rabbitai-braiissueaibody,ABAbELISA試劑盒兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去甲絡(luò)石甙元 HPLC≥98% 5mg Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISA試劑盒兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去甲氧基去乙酰氧基土槿甲酸 B HPLC≥98% 5mg Rabbitai-Monocyteaibody,AMAELISA試劑盒兔抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去甲氧基矢車菊黃酮素 HPLC≥98% 5mg Rabbitai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISA試劑盒兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w(ANGA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去羥加利果酸 HPLC≥98% 5mg RabbitAi-SmoothMuscleAibody,ASMAELISA試劑盒兔抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去氫克班寧 HPLC≥98% 5mg Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISA試劑盒兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去氫苦木堿 HPLC≥98% 5mg RabbitAmylinELISA試劑盒兔胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去氫魚藤素 HPLC≥98% 5mg Rabbitamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISA試劑盒兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

去氧地膽草素 HPLC≥98% 5mg RabbitAngiopoietin2,ANG-2ELISA試劑盒兔血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人體直腸癌組織提取物說明書兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒     6-Aminouracil  873-83-6  中文名：6-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2  度：98.0%   

兔子白介素1β(IL-1β)ELISAKit     6-Benzyloxypurine  57500-07-9  中文名：6-芐氧基嘌呤  分子式：C12H10N4O 

兔子白介素10(IL-10)ELISA試劑盒     6-Aminouracil  873-83-6  中文名：6-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2 

兔子白介素10(IL-10)ELISAKit                 6-Benzyloxyindole  中文名：6-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO 

兔子白介素1(IL-1)ELISA試劑盒     6-Aminoquinoxaline  中文名：6-氨基喹喔啉  分子式：C8H7N3  度：98.0%

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。