人體膀胱癌組織源細胞【Cancer: Human Bladder Cancer Derivatives】

膀胱癌是發(fā)生于膀胱的癌病類疾病，泛指各種出自膀胱的惡性腫瘤，常見的膀胱癌細胞來自膀胱內(nèi)面黏膜表皮，是一種移行上皮細胞，貼壁生長，具有無限增殖能力，喪失接觸抑制現(xiàn)象，癌細胞間粘著性減弱。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體膀胱癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

N6-異戊烯基腺嘌呤溶液（2ip）5×1ml2''-O-Acetylsprengerinin C1273

Neomycin solution 新霉素溶液5×1ml2-n-Propyl-methyl-(1-methylbenzimidazole-yl)benzimidazole1526282

Penicillin G Na Solution 青霉素G鈉鹽溶液 mg/ml5×1ml 2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate1587352-萘基N-苯甲?；奖彼狨?/span>

Penicillin-Streptomycin Solution 0×青鏈霉素溶液0ml2-Methylsulfanylpyrimidin(3H)-one575

Penicillin-Streptomycin Solution 青鏈霉素溶液(0×)0ml2-Methylanthraquinone8442-甲基蒽醌
Dimethylolurea  中文名：雙羥甲脲  分子式：C3H8N2O3    豬水通道蛋白4（AQP4）ELISA試劑盒  

Dihydrotanshinone I  中文名：  分子式：C18H14O3    豬瘦素(LEP)ELISA試劑盒  

Dihydrosenkyunolide C  中文名：二氫洋川芎內(nèi)酯C  分子式：C12H14O3    豬食欲素受體(OXR)ELISA試劑盒  

Dihydroisotanshinone II  中文名：  分子式：C18H14O3    豬食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA試劑盒           

Dihydroisotanshinone I  中文名：  分子式：C18H14O3    豬髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   豬髓0脂堿性蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬髓0脂堿性蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬髓0脂堿性蛋白試劑盒、豬髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
羥乙基纖維素(20000~30000 mpa.s)  Hydroxyethyl Cellulose  質(zhì)量規(guī)格：粘度20000~30000 mpa.s 人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)試劑盒 Human iFABP ELISA Kit

羥乙基纖維素(5500-6500 mpa.s)  Hydroxyethyl Cellulose  質(zhì)量規(guī)格：粘度5500-6500 mpa.s 人超0酸化微管相關(guān)蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)試劑盒 Human hyper phosphorylated MAPT ELISA kit

羥乙基纖維素(40~60 mpa.s)  Hydroxyethyl Cellulose  質(zhì)量規(guī)格：粘度40~60 mpa.s 人超抗原(Sag)ELISA檢測試劑盒Humansupperaigen,SagELISAKit 96T/48T

異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)  Isopropyl β-D-thiogalactoside  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒 Human high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit

甘露糖；D-甘露糖  D-Mannose  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)試劑盒 Human Ula Sensitive Prostate Specific Aigen,PSA U S ELISA Kit

D-甘露糖(標準品)  D-Mannose  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 人超敏熱休克蛋白60(HSP-60)試劑盒 Human Ula Sensitive Heat Shock Protein 60,HSP-60 ELISA Kit

N-辛?；?/span>-N-甲基葡糖胺(MEGA-8)  N-Octanoyl-N-methylglucamine  質(zhì)量規(guī)格：≥97% ,進分 人超敏熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒 Human Ula Sensitive Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit

N-癸酰基-N-甲基葡糖胺(MEGA-10)  N-Decanoyl-N-methylglucamine   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人巢蛋白1(NID1)試劑盒 Human Nidogen 1,NID1 ELISA Kit

辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷  n-Octyl-β-D-Thioglucopyranoside  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人成骨生長肽(OGP)ELISA檢測試劑盒HumanOsteogenicGrowthPeptide,OGPELISAKit 96T/48T

D-綿子糖五水；蜜三糖五水  D(+)-Raffinose pentahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人成纖維細胞生長因子10(FGF10)試劑盒 Human FGF10 ELISA Kit
人體膀胱癌組織源細胞說明書兔子催乳素elisa試劑盒   兔子催乳素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子催乳素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子催乳素試劑盒、兔子催乳素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     8-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  中文名：8-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S 

兔子催乳素elisa試劑盒   兔子催乳素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子催乳素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子催乳素試劑盒、兔子催乳素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione  中文名：  分子式：C28H40O3 

兔子催乳素(PRL)ELISA試劑盒     6β-Hydroxystigmast-4-en-3-one  中文名：6β-羥基豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O2  度：95.0%

兔子催乳素(PRL)ELISAKit                 5-Aminosalicylic acid  中文名：5-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3 

兔子促上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒              6β-Hydroxystigmast-4-en-3-one  中文名：6β-羥基豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O2