PrimaCell™人心肌細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

小鼠組織蛋白酶G(CTSG)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSG ELISA Kit  19121-58-5澳洲茄堿規(guī)格  Solasonine

綿羊主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA檢測試劑盒Sheepmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T  32981-86-510-脫乙?；涂ǘ?/span>III  Deacetylbaccatin III

犬胰島素樣生長因子1(IGF1)試劑盒 Dog insulin-like growth factor 1,IGF1 ELISA kit  27548-93-2巴卡亭Ⅲ說明書  baccatin Ⅲ

英文名稱MouseAGRPELISAKit小鼠Agoi相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  26091-79-2白當(dāng)歸腦品牌  Byakangelicol

薄層色譜分析20樣本  19573-01-4白當(dāng)歸素規(guī)格  Byakangelicin
906-33-2新綠原酸說明書  Neochlorogenic acid  組織二(MDA)比色法定量檢測試劑盒50/100

905-99-7隱綠原酸品牌  Cryptochlorogenic acid  組織短鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

90332-66-47-木糖基-紫杉醇規(guī)格  7-xylosyltaxol   組織短鏈脂酰輔酶A合成酶(ACYLCOASYHETASE)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20

8-乙氧基滇烏堿品牌  8-O-ethylyunaconitine   組織短鏈烯脂酰輔酶A水合酶(ENOYLCOAHYDRATASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

89590-98-7羅漢果苷VI品牌  Mogroside VI   組織丁酰膽堿酯酶活性熒光定量檢測試劑盒20
RatAngiopoietin4,ANG-4ELISAKit大鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  30045-16-0脫氫紫堇堿  Dehydrocorydaline

載玻片細(xì)胞樣品細(xì)胞色素C蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  518-69-4延胡索甲素說明書  （+）- Corydaline

Mouseadvancedglycationendproducts,AGEsELISA試劑盒小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  437-64-9芫花素品牌  Genkwanin

小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 ，英文名： apo-B100 ELISA Kit  529-53-3野黃芩素規(guī)格  Scutellarein

小鼠抗心1脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA檢測試劑盒Mouseai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit 96T/48T  480-39-7喬松素  Pinocembrin
PrimaCell™人心肌細(xì)胞試劑盒培養(yǎng)133-05-1細(xì)辛脂素  Asarinin   英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)規(guī)格：96T/48T

133-04-0細(xì)辛脂素  Asarinin  英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)規(guī)格：96T/48T

13241-33-3新橙皮苷說明書  Neohesperidin   英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生長激素(RatFSH)規(guī)格：96T/48T

13241-33-3新橙皮苷規(guī)格  Neohesperidin  英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生長激素(RatFSH)規(guī)格：96T/48T

13241-28-6大黃酚-8-O-葡萄糖苷品牌  Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside   英文名稱RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游離睪同(Free-Testoterone)規(guī)格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。