PrimaCell™小鼠皮下脂肪細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

小鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA試劑盒 ，英文名： FAS ELISA Kit  1617-53-4穗花杉雙黃酮規(guī)格  Amentoflavone

牛1酸果糖激酶(PFK)ELISA檢測試劑盒BovinePhosphofructokinase,PFKELISAKit 96T/48T  塔拉薩敏  talatisamine

人AFG3樣蛋白2(AFG3L2)試劑盒 Human AFG3L2 ELISA kit  21082-33-7苔黑酚葡萄糖苷說明書  Orcinol glucosid

英文名稱Mouse(IL-1sRI)ELISAkit小鼠白介素1可溶性受體I(IL-1sRI)規(guī)格：96T/48T  11031-45-1檀香醇品牌  Santalol

冰凍切片組織AKT蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20  479-98-1桃葉珊瑚苷規(guī)格   Aucubin
38412-46-3蘆薈寧品牌  Aloenin   載玻片細(xì)胞PAR-3蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

38395-02-7告達(dá)亭苷元規(guī)格  caudatin   載玻片細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

38390-45-3脫水長春堿說明書  3',4'-Anhydrovinblastine   載玻片細(xì)胞PAR-1蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

38243-03-720(R)人參皂苷Rg3規(guī)格  20(R)Ginsenoside Rg3   載玻片細(xì)胞PAR-1蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

38226-86-7脫水羊藿素  Anhydroicaritin   載玻片細(xì)胞P38蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20
稀酰胺1公斤  81907-61-1靈芝酸B說明書  Ganoderic acid B

RatFibrinogen,FbgELISA試劑盒大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  38412-46-3蘆薈寧品牌  Aloenin

小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒 ，英文名： TPA ELISA Kit  5610-40-2一葉萩堿規(guī)格  Securinine

小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒MousecardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit 96T/48T  511-96-6支脫皂苷元  Gitogenin

人抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)試劑盒 human thyroid stimulating hormone receptor aidoby,Ab ELISA Kit  16562-13-3左旋千金藤啶堿說明書  L-Stepholidine
PrimaCell™小鼠皮下脂肪細(xì)胞試劑盒價格51542-56-4人參皂苷Re  Ginsenoside Re  植物蔗糖合成酶(sucrosesyhase)活性比色法定量檢測試劑盒20

514-47-6大戟二烯醇規(guī)格  Euphol   植物蔗糖1酸合成酶(sucrosephosphatesyhase)活性比色法定量檢測試劑盒20

51-34-3東莨菪堿規(guī)格  Scopolamine   植物源性飼料玉米試劑盒20

51330-27-9大豆皂苷Bb說明書  Soyasaponin BB   植物源性食品芝麻(sesame)試劑盒20

51317-08-9β-桉葉醇  β-Eudesmol   植物源性食品羽扇豆(lupine)試劑盒20