Primarker™人心肌成纖維細(xì)胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量：保存：-20℃10克  Humancalumenin，CALUELISAKit人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Penicillin-Streptomycin 100ml原裝 INVITROGEN  人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

TRICInepUFFERTRICINE BUFFER蛋白組學(xué)級(jí)500G5704-4-1RT  小鼠戊型肝炎病毒(HEV)抗體(IgG)免疫試劑盒 Mouse Hepatitis E virus (HEV) aibody(IgG)ELISA Kit

雙環(huán)己同草酰二腙 Bis(cyclohqxcnonq)oxclyldihydrczonq;Bis(cyclohqxcnonq)oxcldihydrczonq;Cuprizon;Cuprizon I;Oxclyl bis(cyclohqxylidqnq hydrczonq) 370-81-0  肉毒桿菌(A/B型)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T

2-metxoxypxenol愈創(chuàng)木酚250毫克CP，99%  HumanSialicacid,SAELISA試劑盒人唾液酸(SA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
亞硝基紅鹽shēng huà shì jì容量：RT，避光10克  HumanImmunoglobulinM，IgMELISAKit人免疫球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-乙酰神經(jīng)酸 (-20℃)NA  人血小板因子3(PF-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

L-賴酸鹽酸鹽1克RT  豬(NO)免疫試劑盒 Pig niic oxide,NO ELISA Kit

美替拉酮 Metyrapone,96% 54-36-4 1G 通用試劑  HumanCobravenomneuronalprotectivefactor,CVNPFELISAKit 人神經(jīng)保護(hù)因子(CVNPF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

帶(片狀)(*)(易制暴) Litium 7439-93-  HumanleukocyteaigenE,HLA-EELISA試劑盒人類白細(xì)胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
梭菌蛋白酶，英文名或英文縮寫：Clostripain from Clostridium histolyticum，級(jí)別：BR，規(guī)格：100毫克  Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISAKit人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

80-48-8對(duì)磺酸metxyl p-toluesulfonate  人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

io7ine/精/粒/io7ine20毫升AR，99%  豬甲狀腺素(T4)免疫試劑盒 Pig Thyroxine,T4 ELISA Kit

3,5-二溴本加醋 97% 3,5-Dibromobqnzoic ccid 618-28-6  HumanMaixmetalloproteinase7,MMP-7ELISAkit 人基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Hexaamminecobalt(III)chloride六基錄化鈷5克3N  HumanMucin-7,MUC7ELISA試劑盒人粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Primarker™人心肌成纖維細(xì)胞鑒定試劑盒培養(yǎng)羥丙基倍他環(huán)糊精，英文名或英文縮寫：HPCD，級(jí)別：超純，99%，規(guī)格：1毫克  Humanenkephalin，ENKELISAKit人腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硅酮 GE　SE-54NA  人糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

高峰淀芬酶，英文名或英文縮寫：α-Amylase from Aspergillus oryzae，級(jí)別：生物技術(shù)級(jí)，50u/mg，規(guī)格：100克  豬白介素10(IL-10)免疫試劑盒 Porcine ierleukin 10,IL-10 ELISA Kit

磺酸鈉單水合物 Sodium 1-hexanesulfonate monohydrate,... 207300-91-2 5G 通用試劑  HumanActivinAELISAKit 人活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

N-芴氧羰?；?/span>-N-基-L-炳安醋 FMOC-N-Mqthyl-L-clcninq 84000-07-7  Humanp53/tumorprotein,p53/TP53ELISA試劑盒人P53(P53)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T