Primarker™人血管內(nèi)皮細胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)10克保存：-20℃  小鼠25羥基膽固醇(25-OHC)ELISA試劑盒 ，英文名： 25-OHC ELISA Kit

20769-85-12-溴-2-甲基2-Bromo-2-metxylpropionyl bromide  牛甘膽酸(CG)ELISA檢測試劑盒Bovinecholyglycine,CGELISAKit 96T/48T

酸鉀shēng huà shì jì容量：1克  人B群鏈球菌多糖抗體(IgG)免疫試劑盒 Human Ai-Group B Septococcal Type III Capsular Aibody IgG ELISA Kit

2，3-二基丁烷　標準品 2,3-DIMqTHYLBUTcNq 1979/9/8  英文名稱MouseEGFELISAKit小鼠表皮生長因子(EGF)規(guī)格：96T/48T

碳酸銅shēng huà shì jì容量：RT5克  冰凍切片脂肪酸費斯克勒(Fischler)染色試劑盒50次
亞硝基-R-鹽，英文名或英文縮寫：nitnoso R salt，級別：BS，規(guī)格：25克  人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

30%(*);二氧化氫;二氧化二氫xy7nogen Peroxide Concentrate  豚鼠γ干擾素(IFN-γ)免疫試劑盒 guinea pig Ierferon γ ,IFN-γ ELISA Kit

青鮮素鉀鹽，英文名或英文縮寫：Maleic hydrazide potewwium salt，級別：BR，98%，規(guī)格：25毫克  四氫生物蝶呤(BH4)ELISA試劑盒 ，英文名： BH4 ELISA Kit

抑肽酶 Aprotinin from bovine lung,≥98% 9087-70-1 1MG 通用試劑  Mouseβmannosidase,βManaseELISA試劑盒小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

固暗藍R鹽;堅牢深藍R鹽;4-安基-2,5-二氧基-4′-肖基偶氮二錄本重氮鹽 Fcst dcrk bluq R sclt;czoic diczo No.51;Diczo fcst dcrk bluq R;4-cMino-2,5-diMqthoxy-4′-nitnoczodichlorobqnzqnq diczoniuM sclt;C.I.37195;  GoatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISA試劑盒山羊腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
隨機引物100毫克2～8℃  Rabbitoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISA試劑盒兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PH緩沖液　PH8.0(20℃)NA  小鼠白介素1α(IL1α)ELISA試劑盒 ，英文名： IL1α ELISA Kit

α-基間二氮茚，英文名或英文縮寫：2-Aminobenzimidazole，級別：AR，99.5%，規(guī)格：100克  人抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA檢測試劑盒humanAi-thyroid-globulinaibody,ATGAELISAKIT 96T/48T

加雷沙星 Garenoxacin,98% 194804-75-6 20MG 通用試劑  大鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)免疫試劑盒 Rat Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA kit

加醋;蟻醋 litxium forMctq 6108-3-  英文名稱Ratβ-ThromboglobulinELISAKit大鼠β血小板球蛋白(β-TG)規(guī)格：96T/48T
Primarker™人血管內(nèi)皮細胞鑒定試劑盒說明書羥丙基-β-環(huán)糊精5克2～8℃  Humanai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit 人抗中性粒細胞顆?？贵w(ANGA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

5445-17-0α-溴metxyl 2-bromopropionate  Humanerythropoiesisstimulatingfactor,ESFELISA試劑盒人紅細胞刺激因子(ESF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

柏木油，英文名或英文縮寫：Cedarwood oil，級別：CP，規(guī)格：25克  組織RSK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

吲哚乙酸酯 Indoxyl acetate,≥95% 608-08-2 1G 通用試劑  HumanOsteopoin,OPNELISAKit人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-高絲安醋;L-類絲安醋;L-2-安基-4-羌基丁醋 L-HoMosqrinq;(S)-2-cMino-4-xy7noxybutyric ccid;Hsq 1967/12/1  腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。