熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：豚鼠皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒說明
英文名稱：Guinea Pig Herpes Virus
貨號：EY-P6770

產(chǎn)品規(guī)格：50T
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產(chǎn)品特點
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 特異性熒光標(biāo)記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
相對定量分析方法  ：
 2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
  1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
    ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
    ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
  2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值：
         ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
  3、計算表達(dá)水平比率：
                    2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

 

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

新生霉素增菌肉湯shēng huà shì jì容量：100克  Humanleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISA試劑盒人白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PH緩沖溶液NA  組織檸檬酸合成酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

DL-絲酸100克  Humanimmunosuppressiveacidicprotein,IAPELISAKit人免疫抑制酸性蛋白(IAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

月桂烯 Myrcene,≥90.0% 123-35-3 25ML 通用試劑  人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

叔丁醇 litxium tqrt-butoxidq 1907-33-1  豬胰島素樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒 Porcine IGF-1 ELISA Kit
葡糖酸內(nèi)酯shēng huà shì jì容量：100克  人抗紡錘體抗體(MSA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

CollagenaseV 100mg Sigma分裝  小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)免疫試劑盒 Mouse maix metalloproteinase 8/Neuophil collagenase,MMP-8 ELISA kit

5-胞苷二嶙酸單鈉鹽100克  乙酰輔酶A羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒 ，英文名： ACC ELISA Kit

cLLTqC-1000  MouseAmylinELISA試劑盒小鼠胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

松胞速B(-20℃) CYTOCHcLcSIN B 14930-96-  ELISAKitCETP小鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白規(guī)格：48T/96T
甲基紅鈉鹽，英文名或英文縮寫：metxyl red wo7ium salt，級別：超純，99%，規(guī)格：100克  人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

329-71-52,5-二硝基本酚(加約20%水濕潤,本品干重約為5g)2,5-pxenOL  小鼠凝血因子Ⅲ(FⅢ)免疫試劑盒 Mouse coagulation factor Ⅲ,FⅢ ELISA Kit

Deoxy-BigCHAP(3a,5b,12a)-N,N-雙[3-(D-葡萄糖?；?/span>)丙基]-3,12-二羥基膽甾烷-24-胺5克標(biāo)準(zhǔn)溶液  腫瘤壞死因子相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)因子(TWEAK)ELISA試劑盒 ，英文名： TWEAK ELISA Kit

2-叔丁基隊酚 2-tqrt-Butyl-4-mqthylphqnol 409-22-4  HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISA試劑盒人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Crotaline單響尾蛇毒蛋白100毫克BR，98%  sPECAM-1小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1規(guī)格：48T/96T
豚鼠皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒說明本酸鉀鹽，英文名或英文縮寫：potewwium benzoate，級別：CP，規(guī)格：10克  HumanHyaluronicacid,HAELISA試劑盒人透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Bis-Acrylamide 25g/100g Amresco 0172  組織肌酐(CREATININE)化學(xué)比色法定量檢測試劑盒20次

AMEDIUMBROTHA 培養(yǎng)基肉湯生物技術(shù)級500GRT  HumanLipoxinA4,LXA4ELISAKit人脂氧素A4(LXA4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

檸檬醋鐵(Ⅲ)銨 綠色 cmmonium fqrric citrctq 1182-27-2  人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Hecogenin海柯吉寧100克CP  Human lipoprotein lipase (LPL) ELISA Kit 人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒