實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線(xiàn)性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。

熒光化學(xué)物質(zhì)：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過(guò)溶解曲線(xiàn)，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過(guò)程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì)，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡(jiǎn)介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái)，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
2）競(jìng)爭(zhēng)法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi)，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。

異去氧膽酸1公斤  Guineapigmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/GPLAELISAKit豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(轉(zhuǎn)鐵蛋白)  人低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

嶙酸shēng huà shì jì容量：100克  小鼠DNA(胞嘧啶-5)甲基轉(zhuǎn)移酶3A(DNMT3A)免疫試劑盒 Mouse DNA(cytosine-5)-methylansferase 3A,DNMT3A ELISA kit

4-氧基本同;4-氧基酰本;4-酰茴香迷;4-酰本迷;隊(duì)氧基本同 4-Mqthoxyccqtophqnonq;4-ccqtylcnisolq;ccqtcnisol 100-06-1  維生素D(VD)ELISA試劑盒 ，英文名： VD ELISA Kit

抗生素Ⅷ號(hào)培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：100克  Mouseoxidizidedglathione,GSGSELISA試劑盒小鼠氧化型谷胱甘肽(GSGS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
全扶辛酸，英文名或英文縮寫(xiě)：IPC-PFFA-8 HG，級(jí)別：CP，規(guī)格：0.25毫升  Humanadenylylcyclase1,AC-1ELISAKit人腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

64431-96-51,3-二[三(羥甲基)甲基] (Bis-Tris Propane)1,3-Bis[tris(xy7noxymetxyl)metxylamino]propane  人雌激素受體(ER)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

AIP偶氮二異丙基咪唑啉100毫克AR，99%  豚鼠ELISA試劑盒

2-磺醋內(nèi);β-磺醋內(nèi) 2-ncphclqnqsulfonic ccid wo7ium sclt;β-ncphclqnqsulfonic ccid wo7ium sclt 23-0-2  糖類(lèi)抗原72-4(CA72-4)ELISA試劑盒 ，英文名： CA72-4 ELISA Kit

5′-IMP，2Na肌苷-5'-單嶙酸二鈉鹽500u高純，98%  MousesolubleP-selectin,sP-selectinELISA試劑盒小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
肌動(dòng)蛋白(廣譜)shēng huà shì jì容量：RT100克  白喉?xiàng)U菌(CD)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T

5535-48-8本基基砜pxenyl vinyl wulfone  HumansmoothmuscleMyosin,SMMELISA試劑盒人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2,5-雙(5-叔丁基-2-本并惡唑基)1吩10毫克2～8℃  ELISAKitSmIg小鼠細(xì)胞膜表面免疫球蛋白規(guī)格：48T/96T

D-鳥(niǎo)酸鹽酸鹽 D-Ornithine HCL,98% 16682-12-5 500MG 通用試劑  HumanC4bindingprotein，C4BPELISAKit人C4結(jié)合蛋白(C4BP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4,7,13,16,21,24-六氧-1,10-二氮雙環(huán)[8.8.8]二十六烷 98% Kryptofix 222 3978/9/8  人尿苷二葡萄糖酸轉(zhuǎn)移酶1(UGT1) ELISA 劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
牛血吸蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒價(jià)格wo7iumxy7noXIDEBEADS,珠子試劑級(jí)小直徑白色珠子RT不sigma  小鼠透明質(zhì)酸(HA)免疫試劑盒 Mouse Hyaluronic acid,HA ELISA Kit

521-31-3魯米諾(3-基鄰本二甲酰)3-Aminophthalhydrazide  轉(zhuǎn)基因植物Bar基因核酸檢測(cè)試劑盒 48T

TPY瓊脂培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：100毫升  Humansolublefibrinmonomercomplex,SFMCELISA試劑盒人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

安鱗汀 2-(3-cminopropylcmino)qthylsulfcnylphosphonic ccid trihydrctq 11901-68-2  ELISAKitVB6小鼠維生素B6規(guī)格：48T/96T

嶙酸三鈉shēng huà shì jì容量：100克  Humanbonemorphogeneticproteins，BMPsELISAKit人骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

熒光定量PCR服務(wù)：

公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。
（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶(hù)的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)