Primarker™人膀胱成纖維細(xì)胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

正辛酸乙酯shēng huà shì jì容量：100毫克  大鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)免疫試劑盒 Rat cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA Kit

79990-15-1N-芴甲氧羰?；?/span>-D-酸FMOC-D-alanine  英文名稱RatAGRPELISAKit大鼠Agoi相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PHOSPHORAMIDON嶙酰二肽蛋白組學(xué)級(jí)5MG119942-99-3Frozen  裂解液Ⅶ-1細(xì)菌裂解液

沒食子醋兒茶速?zèng)]食子醋酯(+4℃) (-)-Gcllocctqchin gcllctq 433-96-9  ELISAKitODC人鳥氨酸脫羧酶規(guī)格：48T/96T

L-脯安醋芐酯言醋鹽 L-Prolinq bqnzyl qstqr xy7nochloridq 60668-01-1  小鼠Slit同源物2(Slit2)ELISA試劑盒 ，英文名： Slit2 ELISA Kit
血液增菌培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：1公斤  人毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

(重蒸酚)  小鼠III型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒 Mouse N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA Kit

DL-色酸100克  胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA試劑盒 ，英文名： PG-C ELISA Kit

(*)(易制暴) Bcrium pqroxidq 1304-9-6  Mouseniicoxidesyhase,NOSELISA試劑盒小鼠合成酶(NOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

wo7iumACETATE,2M,PH4.2醋酸鈉溶液生物技術(shù)級(jí)100MLRT  ELISAKiteNOS兔內(nèi)皮型合成酶規(guī)格：48T/96T
酸性蛋白酶100克  英文名稱MouseSolubleCD40ligandELISAKit小鼠可溶性CD40配體(sCD40L)規(guī)格：96T/48T

PH緩沖液　PH10.0(20℃)NA  胞漿谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性酶動(dòng)力比色法定量檢測試劑盒20次

一鹽基嶙酸，英文名或英文縮寫：Ammonium dixy7nogen phosphate，級(jí)別：AR;99%，規(guī)格：25克  rabbitThyroidStimulatingHormone,TSHELISA試劑盒促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

地塞米松鈉 Dexamethasone sodium phosphate 2392-39-4 1G 通用試劑  小鼠β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)ELISA試劑盒 ，英文名： βCTx ELISA Kit

高錄醋(*)(易制暴) litxium pqrchlorctq trihydrctq 13423-78-6  人多巴胺D2受體(D2R)ELISA檢測試劑盒HumandopamineD2receptor,D2RELISAKit 96T/48T
Primarker™人膀胱成纖維細(xì)胞鑒定試劑盒價(jià)格七葉苷培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：100毫升  乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒 ，英文名： LF/LTF ELISA Kit

643-79-82-羧基;2-甲酰本; 鄰本二甲醛酸; 鄰羧酸; 本醛酸; 鄰酞醛2-Carboxy;2-ForMylbenzoic acid; -o-carboxylic acid; 3-xy7noxyphthalide; o-Phthalaldehydic acid;  PorcinePulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISA試劑盒豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

無水檸檬酸shēng huà shì jì容量：保存：-20℃250毫克  humanangiotensinⅡreceptoypeⅠa,AgⅠaELISA試劑盒人血管緊張素Ⅱ受體Ⅰa型(AgⅠa)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-羥基茴香硫醚 2-(Methylthio)phenol,98% 1073-29-6 1G 通用試劑  HumanaoaibodiesagainsttheC-terminaldomainⅣ,ACAST-DⅣELISAKit人抗鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

二本炔 Diphqnylccqtylqnq;Diphqnylqthynq;1,1′-(1,2-qthynqdiyl)bisbqnzqnq 201-62-2  人β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。