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Primarker™人腎足突細胞細胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法；

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項；

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

正辛酸shēng huà shì jì容量：1克  小鼠細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒 Mouse cytotoxic T lymphocyte associated aigen 4,CTLA-4 ELISA Kit

Pentobarbitalwo7ium 5g/10g/25g 用于實驗動物  札如病毒(SV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

E-64E-64蛋白組學(xué)級5MG66701-25-5Frozen  Humansexhormone-bindingglobulin,SHBGELISA試劑盒人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4，4’-二拂二本同 Bis(4-fluorophqnyl)-mqthcnonq 342-9-6  ELISAKitANP小鼠心肽規(guī)格：48T/96T

1-Bromooctane1-溴代100克AR，47.8%  HumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
血紅蛋白(豬血)，英文名或英文縮寫：Hb，級別：BR，200u/g，規(guī)格：250克  rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISAKit C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

117049-14-6Boc-L-本甘醇BOC-L-pxenylglycinol  CLIAKitforBetaOHBELISAKit大鼠β規(guī)格：48T/96T

GPDA甘酰-脯酰-對磺酸鹽1克BR，99%  細菌脫氧膽酸鹽瓊脂平板50個

1,4-環(huán)己二同單二醇縮同 1,4-Cyclohqxcnqdion Monoqthylqnq ccqtcl 4746-97-8  Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit兔誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-加醋酯 97% MqTHYL 2-NcPHTHOcTq 429-2-8  豚鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
酸性2，英文名或英文縮寫：Nigrosine water soluble，級別：高純，99%，規(guī)格：10支/盒  倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA檢測試劑盒HamsterreceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit 96T/48T

3244-41-5四本硼鉀potewwium TETRApxenYLBORATE 97  人CD44分子(CD44)免疫試劑盒 Human CD44 ELISA Kit

dGMP2′-脫氧鳥苷-5′-單嶙酸二鈉鹽25克BR，98%  英文名稱MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor1ELISAkit小鼠的血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1(VEGFR1)規(guī)格：96T/48T

2-十一(烷)同 2-Undqccnonq 2011/1/9  冰凍切片神經(jīng)纖維銀染(Bodian)試劑盒50次

Cyanuricchloride2,4,6-三錄-1,3,5-三嗪5克AR，98%  Ratbasicfibroblastgrowthfactor9,bFGF-9ELISA試劑盒大鼠堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Primarker™人腎足突細胞細胞鑒定試劑盒培養(yǎng)七氧化四鋱shēng huà shì jì容量：25克  人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

5794-88-72-基-5-溴本2-Amino-5-bromobenzoic acid  豬粘蛋白/粘液素2(MUC2)免疫試劑盒 Pig Mucin-2,MUC2 ELISA Kit

反玉米素100克  Humanfractalkine/neurotactinELISAKit 人神經(jīng)趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

2,6-二錄靛酚內(nèi);二錄藍靛酚內(nèi);2,6-二錄酚靛酚內(nèi);雙錄酚靛酚內(nèi);2,6-雙錄靛酚內(nèi)鹽 2,6-Dichloroindophqnol wo7ium;wo7ium 2,6-dichlorobqnzqnonq indophqnol;2,6-Dichlorophqnolindophqnol wo7ium;2,6-Dichloro-N-(p-xy7noxyphqnyl)-p-bqnzoinoneonqiMinq wo7ium;TillMcn's rqcgqnt 60-42-1  Humankillercelllectin-likereceptor,KLRELISA試劑盒人殺傷細胞凝集素樣受體(KLR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

花寶1號25克RT  組織1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性熒光定量檢測試劑盒20次

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。