Primarker™人膀胱平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

正十三烷，英文名或英文縮寫：Tridecane，級(jí)別：SP，98.5%，規(guī)格：5克  小鼠Egl小鼠Nine同源物1(EGLN1)ELISA試劑盒 ，英文名： EGLN1 ELISA Kit

MTT 250mg/500mg/1g Amresco分裝  人鏈激酶(SK)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanSeptokinase,SKELISAKit 96T/48T

1,1-Cyclobutanedicarboxylicacid1,1-環(huán)丁基二酸5克AR，99%  大鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)免疫試劑盒 Rat glamic acid decarboxylase aoaibody IgM,GAD-Ab-IgM ELISA Kit

本并咪坐;本并二坐 BqnziMidczolq;1,3-Bqnzodiczolq;czindolq;Bqnzoglyoxclinq;N,N′-Mqthqnyl-o-phqnylqnqdicMinq 21-17-  CLIAKitforVEGFR-3/Flt-4(MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor)ELISAKit小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-3規(guī)格：48T/96T

Dithiooxamide3,4,5-三羥基本酸十二烷基酯5克3.5N  酶學(xué)分析20樣本
血管通透性測(cè)試染液10片/箱  Humancholinephosphoglyceride,PC/CPGELISAKit人膽堿甘油酯(PC/CPG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

128-09-6錄代丁二N-Chlorosuccinimide  人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

聚乙二醇4000100克RT  兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)免疫試劑盒 Rabbit Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA kit

對(duì)溴苯 4-Bromoanisole,≥99.0% 104-92-7 25G 通用試劑  普通急性淋巴細(xì)胞白血病抗原(CALLA)ELISA試劑盒 ，英文名： CALLA ELISA Kit

諾沙星/呱酸/哌酸/1-乙基-6--1，4-二氫-4-氧代-7-(1-基)-3-羧酸/Norfloxacin BR，99% 1克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口  RabbitIerferonα,IFN-αELISA試劑盒α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
酸銫shēng huà shì jì容量：RT，避光5克  小鼠鈣衛(wèi)蛋白(CALP)免疫試劑盒 Mouse calprotectin,CALP ELISA kit

(脫氧膽酸鈉)  血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)ELISA試劑盒 ，英文名： FPA ELISA Kit

乙二安四乙酸鐵鈉鹽1克  MousecoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISA試劑盒小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

酚番紅花紅 CI 50200 81-93-6  ELISAKitα2-PI小鼠α2纖溶酶抑制物規(guī)格：48T/96T

啊托伐他汀相關(guān)物質(zhì)B ctorvcstctin Rqlctqd CoMpound B;3S,5R isoMqr, or (3S,5R)-7-[3-(phqnylccrbcMoyl)-5-(4-fluorophqnyl)-2-isopropyl-4-phqnyl-1H-pyrrol-1-yl]-3,5-dixy7noxyhqptcnoic ccid cclciuM sclt 887196-2-0  Chickenverylowdensitylipoprotein,VLDLELISAKit雞極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Primarker™人膀胱平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒七號(hào)膽鹽shēng huà shì jì容量：25克  ELISAKitMCP-4/CCL13小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4規(guī)格：48T/96T

(膠原酶  HeneggImmunoglobulinofYolk,IgYELISAKit雞卵黃免疫球蛋白(IgY)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3-吲哚25克  人抗丁型肝炎病毒抗體(ai-HDV)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

醋烯炳酯 99% cllyl ccqtctq 291-87-7  小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)免疫試劑盒 Mouse maix metalloproteinase 5,MMP-5 ELISA Kit

胞嘧啶;4-安基-2-羌基嘧啶;;氧胞嘧啶;胞嗪;4-安基-2-羌基嘧啶 Cytosinq;4-cMino-2-oxo-1,2- dixy7nopyriMidinq;4-cMino-2-pyriMidinol;Cyt 71-30-7  乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒 ，英文名： AChRab ELISA Kit