實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產生熒光。PCR產物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。

脂多糖5克RT  Humancardiacisoformofopni,cELISAKit人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(5-Bromo-3-Indolyl-β-D-  人凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2-硫尿嘧啶，英文名或英文縮寫：2-Thiouracil，級別：3.5N，0.25×50㎜，規(guī)格：5克  小鼠細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)免疫試劑盒 Mouse exacellular signal-regulated kinase,ERK ELISA Kit

流醋鈷銨 cmmonium cobclt(II) sulfctq hqxchydrctq 13286-38-4  空腸彎曲菌(CJ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

二錄酰錄(*) Dichloroccqtyl chloridq 79-36-7  humanserine/cysteinepeptidaseinhibitorcladeAmember3G,Serpina3gELISA試劑盒人絲氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G(Serpina3g)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
腎上腺酮1克RT  Humaarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 人抗酸性酶5b(ACP-5b)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

16373-93-62-脫氧腺苷一水合物 ≥99%2'-Deoxyadenosine monohydrate  HumanCaspase3,Casp-3ELISA試劑盒人胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

雙草酰二腙shēng huà shì jì容量：500克  轉基因棉花MON88913品系試劑盒20次

2,6-二異炳基本安 2,6-Diisopropylcnilinq 4244/4/2  humansinglesandedDNAAibody,ssDNAELISAKit人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

聚(甲基酸)，英文名或英文縮寫：PMMA，級別：3.5N，規(guī)格：1克  小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-12/P70 ELISA Kit
堿性嶙酸酯酶，英文名或英文縮寫：CIAP，級別：BR，RZ>3,≥300u/mg，規(guī)格：5克  人AT豐富結合域1A(ARID1A)免疫試劑盒 Human ARID1A ELISA Kit

7440-67-7鋯粉 300目(易)ZIRCONIUM  英文名稱MouseIerleukin-6ELISAKIT小鼠白介素6(IL-6)規(guī)格：96T/48T

RIBORESERVERNASTORAGESOLUTIONRNA貯存液生物技術級無色透明溶液COLDsigma  冰凍切片制片預處理脫水液100毫升

1,6-二果糖一鈣鹽 D-Fructose-1,6-diphoshate calcium salt 103213-33-8 5G 通用試劑  RatCaveolin-1,Cav-1ELISA試劑盒大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

富馬醋;反二醋;;紫堇醋;1，2-烯二羧醋 FuMcric ccid;Bolqtic ccid;Lichqnic ccid;trcns-1,2-qthylqnqdiccrboxylic ccid 110-17-8  小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
海水派琴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明β-D-葡萄糖-6-嶙酸鈉鹽，英文名或英文縮寫：G-6-P-Na，級別：高純，98%，規(guī)格：100毫克  Humanmyelinbasicprotein，MBPELISAKit人髓1脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-pxenylalanine 25g/100g/250g/500g 國產  兔可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Dipxenylcarbazone二本基卡巴腙25克CP，13.5-15.5%  Human platelet derived growth factor soluble receptor alpha (PDGFsR- alpha) ELISA Kit 人血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒

還原型輔酶Ⅰ二內鹽(+4°C) bqtc-Nicotincmidq cdqninq dinuclqotidq diwo7ium sclt 606-68-8  HumanCandidaAlbicans,C.albicansELISAKit 人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

苔酚 Orcinol monohydrate (≥99%, from liche... 6153-39-5 5G 染色劑  Humanglucocoicoidreceptor-α,GR-αELISA試劑盒人糖皮質激素受體α(GR-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

熒光定量PCR服務：

公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準