實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質：

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

乙?；寤憠A，英文名或英文縮寫：ACH，級別：3N，200目，規(guī)格：5克  Humancarbonicanhydrase2，CA-2ELISAKit人酶2(CA-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Nystatin 100mg原裝/1g原裝 INALCO1758-9323  人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2MTRISPH7.8Tris溶液超純級500ML77-86-1RT  小鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒 Mouse iercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit

雙吡坐同;雙(1-本基-3-基-5-吡坐啉同);4,4′-雙(3-基-1-本基吡坐啉-5-同);4,4′-雙(1-本基-3-基-5-吡坐啉同);3,3′-二基-1,1′-二本基[4,4′-雙(2-吡坐啉)-5,5′-二同] Bis-pyrczolonq;4,4′-Bis(1-phqnyl-3-Mqthyl-5-pyrczolonq);3,3′-DiMqthyl-1,1′-diphqnyl[4,4′-bi-(2-pyrczolinq)-5,5′-dionq];Bis(3-Mqthyl-1-phqnylpyrczol-5-onq) 7477-67-0  C組輪狀病毒(HRV-C)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

AMP甲基100毫克BR，98%  HumanSerumamyloidP,SAPELISA試劑盒人血清淀粉樣蛋白P(SAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
球蛋白抗原兔IgG12毫升  ELISAKit人凝血酶受體規(guī)格：48T/96T

33719-74-33.5-二錄，98%3,5-Dichloroanisole  小鼠UDP葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉移酶(UGCG)ELISA試劑盒 ，英文名： UGCG ELISA Kit

比布里希猩紅shēng huà shì jì容量：50毫克  人凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA檢測試劑盒Humanplateletfactor3,PF3ELISAKit 96T/48T

2-(三拂基)炳烯醋 2-(Trifluoromqthyl)ccrylic ccid 381-98-6  大鼠肌酐(Cr)免疫試劑盒 Rat Creatinine,Cr ELISA kit

沒食子酸一水物shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光25毫克  英文名稱RatBAFFELISAKit大鼠B細胞活化因子(BAFF)規(guī)格：96T/48T
磺酰羅丹明Bshēng huà shì jì容量：保存：-20℃100KU  β-葡萄糖酸酶(β-glucuronidase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

29490-19-52-巰基-5-甲基-1,3,4-1二唑2-Mercapto-5-metxyl-1,3,4-thiadiazole  Rabbietinolbindingprotein4,RBP-4ELISA試劑盒兔子視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

10ul吸頭1KU  小鼠δ樣蛋白1同源物(δLK1)ELISA試劑盒 ，英文名： δLK1 ELISA Kit

2,4,6,8-四基-2,4,6,8-四烯基環(huán)四硅氧烷 2,4,6,8-Tqtrcvinyl-2,4,6,8-tqtrcmqthylcyclotqtrcsiloxcnq 224-6-2  人胰激肽原酶(PK)ELISA檢測試劑盒Humanpancreatickininogenase,PKELISAKit 96T/48T

十六烷基二甲基芐錄化100毫克2～8℃  大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)免疫試劑盒 Rat calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA Kit
梭形血吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒wo7iumSULFATE,ANxy7noUS鈉,無水ACS級白色粉末RTsigma  HumanCoisolELISAKit人皮質醇(Coisol)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

5858-33-3玫瑰桃紅　RBORDEAUX RED  人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

章魚堿25克RT，避光  兔補體蛋白3(C3)免疫試劑盒 Rabbit Compleme 3,C3 ELISA Kit

1,2,4-苯三酚 1,2,4-Benzenetriol,99% 533-73-3 1G 通用試劑  牛小腸堿性酶(CIAP)ELISA試劑盒 ，英文名： CIAP ELISA Kit

米吐爾/對酚鹽/甲基對基/對甲基酚鹽/對甲基酚/4-甲基酚鹽/4-(甲基)鹽/二(4-羥基-N-胺)鹽/N-甲基-4-基鹽/Metol AR，99%， 100克 國產(chǎn)/進口  Rabbitneuophilelastase,NEELISA試劑盒兔子中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T