PrimaCell™人卵巢成纖維細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

小鼠組蛋白H2A(H2A)ELISA試劑盒 ，英文名： H2A ELISA Kit  39524-08-8川續(xù)斷皂苷VI說明書   Asperosaponin Ⅵ

山羊檢測(acetone)ELISA檢測試劑盒GoatacetoneELISAKit 96T/48T  33289-85-9川續(xù)斷皂苷乙品牌  Dipsacoside B

犬血纖蛋白原(Fbg)試劑盒 Dog fibrinogen,Fbg ELISA Kit  5508-58-7新穿心蓮內(nèi)酯規(guī)格  Neoandrographolide

英文名稱Mouse17-HydroxycoicosteroidsELISAKIT小鼠17-羥皮質(zhì)類(17-OHCS)規(guī)格：96T/48T  5508-58-7穿心蓮內(nèi)酯  Andrographolide

腸出血性大腸埃希菌(EerohaemorrhagicE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20  41743-73-1野鳶尾黃素說明書  Irisflorentin
7770-78-7牛蒡子苷元  Arctigenin   組織3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶活性直接比色法定量檢測試劑盒20

77690-92-76'''-阿魏酰斯皮諾素品牌  6'''Feruloylspinosin   組織3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶活性間接比色法定量檢測試劑盒20

77-60-1劍麻皂苷元說明書  Tigogenin   組織3-羥-3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶比色法定量檢測試劑盒20

77-52-1熊果酸說明書  Ursolic Acid  組織3-1酸甘油脫氫酶(GAPDH)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20

76996-27-5伽升沃C規(guī)格  Garcinone C   組織1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性熒光定量檢測試劑盒20
RatHyaluronicacid,HAELISA試劑盒大鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  497-76-7熊果苷  Arbutin

小鼠正常T細胞表達和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒 ，英文名： RAES/CCL5 ELISA Kit  77-52-1熊果酸說明書  Ursolic Acid

小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA檢測試劑盒Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit 96T/48T  128-13-2熊去氧膽酸品牌   Ursodeoxycholic Acid

人巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)試劑盒 Human MIP-1β ELISA kit  60137-06-6雪膽素甲規(guī)格  Curcurbitacin IIa

Ratalkalinephosphatase,ALPELISAKit大鼠堿性1酸酶(ALP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  50298-90-3雪膽素乙  Curcubitacin IIb
PrimaCell™人卵巢成纖維細胞試劑盒173220-07-0構(gòu)樹堿A說明書  Broussonetine A   英文名稱RatInsulinELISAKit大鼠胰島素(Insulin)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

17306-46-6野漆樹苷說明書  Rhoifolin  英文名稱RatInsulinELISAKit大鼠胰島素(Insulin)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

17306-46-6野漆樹苷規(guī)格  Rhoifolin   英文名稱RatInsulieceptorβ(ISR-β)ELISAKIT大鼠胰島素受體β(ISR-β)規(guī)格：96T/48T

17233-22-6黃花敗醬苷C說明書  Scabioside C   英文名稱RatInsulieceptorβ(ISR-β)ELISAKIT大鼠胰島素受體β(ISR-β)規(guī)格：96T/48T

171485-39-5肉豆蔻木脂素品牌  Myrislignan  英文名稱RatinhibinBELISAKit大鼠抑制素B(INHB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T