直腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物【Human Rectum MatchPair: Normal Rectum Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人直腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人直腸上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人直腸上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人直腸組織和腫瘤組織中制備。正常人直腸組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

腸出血性大腸桿菌致賀毒素1（Stx1）單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒481-Methyl-aminomethyl naphthalene144895

腸出血性大腸桿菌致賀毒素2（Stx2）單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Terbinafine911611特比萘芬

腸出血性大腸桿菌黏附抹平因子（Eae）單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48N-[3-Chloro-(3-fluorobenzyloxy)phenyl]-iodoquinazolin-amine23127

腸出血性大腸桿菌溶血素（Hly）單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒483-Chloro-(3-fluorobenzyloxy)nitrobenzene4438829

腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒485-(4-((3-chloro-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-yl)furan-carbaldehyde2312784
Fingolimod hydrochloride  162359-56-0  中文名：鹽酸芬戈莫德  分子式：C19H34ClNO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISAKit  

Fingolimod  162359-55-9  中文名：芬戈莫德  分子式：C19H33NO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISAKit  

Finasteride  98319-26-7  中文名：非那雄胺  分子式：C23H36N2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISAKit  

Ficaprenol 11  26296-50-4  中文名：  分子式：C55H90O  度：%  關(guān)鍵詞：  中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISAKit              

Fexofenadine hydrochloride  153439-40-8  中文名：鹽酸非索非那定  分子式：C32H40ClNO4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠雙酪酸（dityrosine）ELISA試劑盒
雙甘氨二肽  Gly-Gly  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人紅細(xì)胞原卟啉(EP)試劑盒 Human erythrocyte protoporphyrin,EP ELISA Kit

重組人胰島素  Human recombinant Insulin  質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定 人琥珀酰輔酶A合成酶(SCS)試劑盒 Human succinyl coenzyme A syhetase,SCS ELISA kit

人胰島素  Human Insulin  質(zhì)量規(guī)格：測(cè)定用 人花生四烯酸(AA)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanArachidonicAcid,AAELISAKit 96T/48T

硝酸舍他康唑  Sertaconazole nitrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人花生四烯酸(AA)試劑盒 Human Arachidonic Acid,AA ELISA Kit

醋酸依降鈣素   Elcatonin Acetate  質(zhì)量規(guī)格：BR 人花生四烯酸12 - 脂氧合酶，12S型(ALOX12/LOG12)試劑盒 Human ALOX12 ELISA Kit

醋酸恩夫韋地   Enfuvirtide Acetate  質(zhì)量規(guī)格：BR,>98% 人花生四烯酸15脂加氧酶(ALOX15/LOG15)試劑盒 Human ALOX15/LOG15 ELISA kit

D-海藻糖無(wú)水  D-(+)-Trehalose Anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BR 人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanarachidonate5-lipoxygenase,ALOX-5ELISAKit 96T/48T

二醋酸戈那瑞林(LH-RH)  Gonadorelin Acetate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,二醋酸鹽 人花生四烯酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)試劑盒 Human Arachidonate 5-lipoxygenase,ALOX5/LOG5 ELISA kit

醋酸戈舍瑞林   Goserelin Acetate  質(zhì)量規(guī)格：BR,>98% 人踝蛋白(talin)ELISA檢測(cè)試劑盒HumaalinELISAKit 96T/48T

醋酸亮丙瑞林   Leuprolide Acetate  質(zhì)量規(guī)格：BR,>98% 人踝蛋白(talin)試劑盒 Human talin ELISA Kit
直腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物說(shuō)明書胎球蛋白 -A(Fetuin-A)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Varenicline tartrate  375815-87-5  中文名：酒石酸伐侖克林  分子式：C17H19N3O6 

羧酸酯酶（CarE）測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine hydrochloride  28783-41-7  中文名：  分子式：C7H10ClNS  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

損傷分子1   英文名稱：   Human Kidney Injury Molecule 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   KIM-1  4,4'-Dimethoxytrityl chloride  40615-36-9  中文名：4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷  分子式：C21H19ClO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

髓過(guò)氧化物酶（MPO）檢測(cè)   Myeloperoxidase (MPO) detection  Rasagiline mesylate  161735-79-1  中文名：甲磺酸雷沙吉蘭  分子式：3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

髓過(guò)氧化物酶（MPO）測(cè)試盒   Myeloperoxidase (MPO) test kit  Ranitidine hydrochloride  中文名：鹽酸雷尼替丁  分子式：C13H23ClN4O3S

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。