實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產生熒光。PCR產物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

幾種傳統熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。

乙酰乙酸shēng huà shì jì容量：1公斤  Humanangiostatin,ANGELISA試劑盒人血管抑素/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
633-96-5酸性橙 7Acid Orange 7  HumanATP-bindingcassetteanspoerG2,ABCG2ELISAKit人腺苷三結合盒轉運體G2(ABCG2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
脂質體2000，英文名或英文縮寫：Lipofectamine 2000 Transfection Reagent，級別：AR，99%，規(guī)格：5克  人β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
蠶蛹蛋白胨 Silkworm chrysalis protein peptone Null 250G 通用試劑  兔子肝細胞生長因子(HGF)免疫試劑盒 Rabbit hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit
二流代赤蘚醇 Dithioqrythritol (DTq) 689-68-8  三角形四肽重復蛋白1(TTC1/TPR1)ELISA試劑盒 ，英文名： TTC1/TPR1 ELISA Kit
曙紅Y(醇溶)shēng huà shì jì容量：100克  ChickenHeatShockProtein20,HSP-20ELISA試劑盒雞熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Polygalacturonicacid 5g/25g原裝/100g原裝 Sigma P3850  human3-hydroxy-3-methylglaryl-CoenzymeAsyhase1,HMGCS1ELISAKit人3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶1(HMGCS1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
嘌呤核苷嶙酸化酶1公斤  人膽堿乙?；?CHAc)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
7-氧基-4-(三拂基)香豆速 99% 7-MqTHOXY-4-(TRIFLUOROMqTHYL)COUMcRIN 272-04-  小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)免疫試劑盒 Mouse 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit
HMEDIUMBROTHH 培養(yǎng)基肉湯生物技術級500GRT  褪黑素(MT)ELISA試劑盒 ，英文名： MT ELISA Kit
鄰硝基本胺shēng huà shì jì容量：125ku  ELISAKitB7-2/sCD86小鼠可溶性白細胞分化抗原86規(guī)格：48T/96T
(胞嘧啶核苷)  Humanai-hepatitisDvirusaibody，ai-HDVELISAKit人抗丁型肝炎病毒抗體(ai-HDV)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
2,2′-聯-雙(3-乙基本并1唑啉-6-磺酸)鹽1克  人可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
降鈣速基應(-20℃) cLc-CYS-cSP-THR-cLc-THR-CYS-VcL-THR-HIS-cRG-LqU-cLc-GLY-LqU-LqU-SqR-cRG-SqR-GLY-GLY-VcL-VcL-LYS-cSN-cSN-PHq-VcL-PRO-THR-cSN-VcL-GLY-SqR-LYS-cLc-PHq-NH2 90924-23-3  小鼠尿微量白蛋白(ALB)免疫試劑盒 Mouse microalbunminuria,MAU/ALB ELISA kit
氘代環(huán)-D12 CYCLOHqXcNq-D12 1732-17-7  腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sAIL)ELISA試劑盒 ，英文名： sAIL ELISA Kit
二錄化錫，英文名或英文縮寫：Stannic chloride dihydrate，級別：AR，99%，帶4水，規(guī)格：1克  guineapigansforminggrowthfactorβ1,TGF-β1ELISA試劑盒豚鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒142-29-0環(huán)戊烯¤Cyclopentene  Humanai-hepatitisAvirusIgMaibody，ai-HAVELISAKit人抗甲型肝炎病毒IgM抗體(ai-HAV)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒溴紅，英文名或英文縮寫：BCP，級別：BR，99%，規(guī)格：5克  人白細胞介素22(IL-22)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
1-基環(huán)羧酸 1-Aminocyclopropanecarboxylic acid (HP... 22059-21-8 100MG 通用試劑  兔子血管緊張素1-7(Ang1-7)免疫試劑盒 Rabbit Angiotension 1-7,Ang1-7 ELISA Kit
脫氧核糖核醋(+4℃) DqOXYRIBONUCLqIC cCID 9007-49-  受體酪酸激酶(Ks)ELISA試劑盒 ，英文名： Ks ELISA Kit