細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）抗肝細(xì)胞生長因子(HGF)雜交瘤細(xì)胞；HGF2培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 抗肝細(xì)胞生長因子(HGF)雜交瘤細(xì)胞；HGF2
形態(tài)特性淋巴母細(xì)胞樣

生長特性半貼壁生長

特征特性可產(chǎn)生單克隆抗體，抗原為肝細(xì)胞生長因子HGF。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

傳代方法保持細(xì)胞密度在1×105～1×106cells/ml之間，每周換液2～3次

傳代情況不詳

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測陰性

STR-

同工酶

染色體

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到抗肝細(xì)胞生長因子(HGF)雜交瘤細(xì)胞；HGF2后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-WIP1/FITC熒光素標(biāo)記原癌基因WIP1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-WNK1/FITC熒光素標(biāo)記賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-WNK3protein/FITC熒光素標(biāo)記絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-WNK4/FITC熒光素標(biāo)記一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Il-7Ra(CD127)/RBITC羅丹明標(biāo)記白細(xì)胞介素-7受體a抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IL-17/RBITC(Interleukin-17)羅丹明標(biāo)記白細(xì)胞介素17抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-HAS/RBITC紅色羅丹明標(biāo)記人血清白蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD14/RBITC紅色羅丹明標(biāo)記CD14蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-NHE1/RBITC紅色羅丹明標(biāo)記鈉氫通道蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-RAMP-1/RBITC紅色羅丹明標(biāo)記受體活性調(diào)制蛋白1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
抗肝細(xì)胞生長因子(HGF)雜交瘤細(xì)胞；HGF2*Anti-Phospho-MYPT1(Ser507)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化肌球蛋酸酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-MYPT1(Ser668)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-MYPT1(Thr696)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-MYPT1(Thr853)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MYL1/MYL2/FITC熒光素標(biāo)記肌球蛋白輕鏈1/2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-MYL2(Ser19)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化肌球蛋白輕鏈2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MYL3/Myosinlightchain3/FITC熒光素標(biāo)記肌球蛋白輕鏈3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MYL3/Myosinlightchain3/Biotin生物素標(biāo)記肌球蛋白輕鏈3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MLH1/FITC熒光素標(biāo)記錯配修復(fù)蛋白1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MMP-1/FITC熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
抗肝細(xì)胞生長因子(HGF)雜交瘤細(xì)胞；HGF2冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。