細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤；M5076圖片準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤；M5076圖片
形態(tài)特性梭

生長特性半懸浮生長，貼壁細(xì)胞呈短梭

。

特征特性該細(xì)胞來源于C57BL/6小鼠卵巢組織自發(fā)的網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤，經(jīng)細(xì)胞

態(tài)和功能鑒定后為巨噬細(xì)胞來源：該細(xì)胞具有吞噬活性；表達(dá)Fc受體，與綿羊紅細(xì)胞

成玫瑰花環(huán)；對(duì)51Cr標(biāo)記的紅細(xì)胞具有抗體依賴的細(xì)胞毒反應(yīng)；對(duì)同源小鼠腫瘤細(xì)胞（B16-F1）有巨噬細(xì)胞樣的細(xì)胞毒作用，且不需要LPS的激活；沒有NK細(xì)胞的活性；具有同小鼠腹腔巨噬細(xì)胞相當(dāng)?shù)娜芫?、非特異性酯酶和磷酸酶的活性；超微結(jié)構(gòu)顯示該細(xì)胞內(nèi)有吞噬小泡，缺乏緊密連接，這些特點(diǎn)都符合巨噬細(xì)胞的

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤；M5076圖片后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-Lxn(Latexin)/FITC熒光素標(biāo)記羧肽酶抑制劑抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-ATEXPA10/FITC熒光素標(biāo)記植物延長蛋白（擬南芥）IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Ly-6G/FITC熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞抗原6G抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-LY-86/MD-1/FITC熒光素標(biāo)記MD-1蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-LY-96/MD-2/ESOP-1/FITC熒光素標(biāo)記MD-2蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Lysozyme/FITC熒光素標(biāo)記溶菌酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Lyn(Tyr507)/FITC熒光素標(biāo)記膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Lyn(Tyr396)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Lyn(Tyr497)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-LYVE-1/FITC熒光素標(biāo)記淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體抗體規(guī)格：0.2ml
小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤；M5076圖片*Anti-cofilin/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠絲切蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Cofilin(Ser3)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化絲切蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Cortactin/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠皮層肌動(dòng)蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Cortactin(phosphoTyr466)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化皮層肌動(dòng)蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-COLEC12/CL-P1/FITC熒光素標(biāo)記凝集胎盤蛋白1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-GlycodelinA/PP14/FITC熒光素標(biāo)記胎盤蛋白14抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Clusterin-Alpha/Beta/FITC熒光素標(biāo)記凝聚素α/β抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-C-Myc/HRP(MYC/MTLC)辣根過氧化物酶標(biāo)記致癌基因C-Myc抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-C-Mer/MERTK/FITC熒光素標(biāo)記c-mer原癌基因酪氨酸激酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-C-Met/HGFR/FITC熒光素標(biāo)記肝細(xì)胞生長因子受體(原癌基因蛋白)抗體IgG規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤；M5076圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。