細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人肺癌細(xì)胞；A549 [A-549]圖片準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人肺癌細(xì)胞；A549 [A-549]圖片
形態(tài)特性上皮樣；多角

生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)

特征特性該細(xì)胞系是1972年由GiardDJ通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系的，源自一位58歲的白人男性。A549能通過胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂；角蛋白陽(yáng)性。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

傳代方法1：3傳代；3-4天一次

傳代情況PN9

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè)熒光法（-）

STRAmelogenin：X，Y；CSF1PO：10，12；D13S317：11；D16S539：11，12；D18S51：14，17；D19S433：13；D21S11：29；D2S1338：24；D3S1358：16；D5S818：11；D7S820：8，11；D8S1179：13，14；FGA：23；TH01：8，9.3；TPOX：8，11；vWA：14；

同工酶

染色體62-66

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人肺癌細(xì)胞；A549 [A-549]圖片后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-Insulin/FITC熒光素標(biāo)記標(biāo)記胰島素抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Insulin/FITC熒光素標(biāo)記胰島素抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Insulin(1-51protein)/FITC熒光素標(biāo)記胰島素1-51蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Integrinalpha1/CD49a/FITC熒光素標(biāo)記整合素α1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IntegrinAlpha2/CD49b/FITC熒光素標(biāo)記整合素α2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IntegrinAlpha2b/CD41/FITC熒光素標(biāo)記血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IntegrinAlpha3/FITC熒光素標(biāo)記整合素α3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IntegrinAlpha3Beta1/FITC熒光素標(biāo)記整合素α3β1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Integrina7/FITC熒光素標(biāo)記整合素α7抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IntegrinAlphaE2/CD103/FITC熒光素標(biāo)記整合素αE2抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人肺癌細(xì)胞；A549 [A-549]圖片*Anti-CD34/PE熒光素PE標(biāo)記CD34抗體（細(xì)胞表面的唾液粘蛋白）IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CR1/CD35/FITC熒光素標(biāo)記Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體（C3b/C4b受體抗體）IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD36/FITC熒光素標(biāo)記CD36抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD38(human)/FITC熒光素標(biāo)記抗CD38抗體（人）IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD38(mouse,rat)/FITC熒光素標(biāo)記抗CD38抗體（小鼠、大鼠）IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD40L/FITC熒光素標(biāo)記抗CD40L抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD34/RBITC紅色熒光素羅丹明標(biāo)記CD34抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD44/FITC熒光素標(biāo)記CD44抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD43/SPN/FITC熒光素標(biāo)記CD43抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD44/RBITC紅色熒光素羅丹明標(biāo)記CD44抗體IgG規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人肺癌細(xì)胞；A549 [A-549]圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。