冷凍保存細(xì)胞之方法：
人肺腺癌細(xì)胞；Calu-3圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人肺腺癌細(xì)胞；Calu-3圖片
形態(tài)特性上皮細(xì)胞

生長特性貼壁生長

特征特性該細(xì)胞是從一名25歲的白人男性肺腺癌患者的胸水中分離建立的；該患者曾使用過環(huán)磷酰胺、博來霉素、阿霉素進(jìn)行治療。該細(xì)胞接種至裸鼠可成瘤；可作轉(zhuǎn)染宿主。

培養(yǎng)條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化20分鐘。1:2。5-6天長滿。

傳代情況P(19+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人肺腺癌細(xì)胞；Calu-3圖片準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人肺腺癌細(xì)胞；Calu-3圖片后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-CD31(PECAM-1)/PE熒光素PE標(biāo)記血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD31(PECAM-1)/HRP辣根過氧化物酶標(biāo)記血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD31/FITC熒光素標(biāo)記血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD33/Siglec-3/FITC熒光素標(biāo)記抗CD33抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD33/FITC熒光素標(biāo)記抗CD33抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD33L/OBBP1/FITC熒光素標(biāo)記兔CD33L抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD34/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、兔、牛、豬、犬CD34抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD34(C-term)/FITC熒光素標(biāo)記CD34抗體（細(xì)胞表面的唾液粘蛋白）C端蛋白多肽IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Anti-CD44v10/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD44V10抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD34/PE熒光素PE標(biāo)記CD34抗體（細(xì)胞表面的唾液粘蛋白）IgG規(guī)格：0.2ml
人肺腺癌細(xì)胞；Calu-3圖片*Anti-phospho-c-Raf(Ser289)磷酸化原癌基因c-Raf抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-phospho-c-Raf(Ser259)磷酸化原癌基因c-Raf抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-phospho-c-Raf(Ser296)磷酸化原癌基因c-Raf抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-phospho-c-Raf(Ser338)磷酸化原癌基因c-Raf抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-RASGRF1Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子1規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-RasGRF1(Ser916)磷酸化Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子1規(guī)格：0.1ml

*Anti-RAR-Alpha維甲酸受體-α抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-RARBeta維甲酸受體β抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-RASSF1ARas相關(guān)區(qū)域家族1A抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Pan-rasPanras抗體規(guī)格：0.1ml
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