細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)
形態(tài)特性多角 生長特性貼壁生長 特征特性在0.6mg/ml新霉素G418存在下，用溫度敏感的表達(dá)載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然的胎兒四肢組織，建立了此細(xì)胞系。在許可溫度33.5oC下細(xì)胞分裂很快，而在限制溫度39.5oC下細(xì)胞極少分裂或不分裂。這些細(xì)胞具有分化為表達(dá)造骨細(xì)胞表型的成熟造骨細(xì)胞的能力。這些細(xì)胞提供了一個同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細(xì)胞的分化，造骨細(xì)胞生理和激素，生長因子，和對造骨細(xì)胞的功能及分化有影響的細(xì)胞因子。 培養(yǎng)條件DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS+300ng/mlG418 傳代方法1:2傳代，3天傳代一次 傳代情況 凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+39%FBS 支原體檢測培養(yǎng)法（-） STRAmelogenin：X；CSF1PO:10,13；D12S391:20,23；D13S317:11,12；D16S539:9,13；D18S51:10,17；D19S433:13,15；D21S11:29,32.2；D2S1338:23,24；D3S1358:17,18；D5S818:11,12；D6S1043:13,16；D7S820:8,10；D8S1179:10,14；FGA:19,22；PentaE:8,11；TH01:7,9.3；TPOX:11；vWA:16,18； 同工酶 染色體
注意事項：
?1.一般客戶拿到SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
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SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原LFABP/FABP-1(LiverFattyacidbindingprotein)肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原0.5mgLFABP/FABP-1(LiverFattyacidbindingprotein 肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原LFABP/FABP-2(LiverFattyacidbindingprotein)肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原0.5mgLFABP/FABP-2(LiverFattyacidbindingprotein Lgr5/GPR49腸上皮干細(xì)胞蛋白（多肽）0.5mgLgr5/GPR49腸上皮干細(xì)胞蛋白（多肽 LH(LuteinizingHormone)人促黃體生成素(多肽)0.5mgLH(LuteinizingHormone 促黃體生成素抗原LH(LuteinizingHormone)促黃體生成素抗原0.5mgLH(LuteinizingHormone 人促黃體生成素受體抗原LH/CGReceptor(LuteinizingHormone/ChoriogonadotropinReceptor)人促黃體生成素受體抗原0.5mgLH/CGReceptor(LuteinizingHormone/ChoriogonadotropinReceptor L-組氨酸脫羧酶抗原L-HDC(L-Histidinedecarboxylase)L-組氨酸脫羧酶抗原0.5mgL-HDC(L-Histidinedecarboxylase 肝腸鈣粘連蛋白抗原LI-cadherin(liver-intestinecadherin)肝腸鈣粘連蛋白抗原0.5mgLI-cadherin(liver-intestinecadherin
冷凍保存細(xì)胞之方法：
SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞；hFOB 1.19培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 |
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