細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）人胚胎肺成纖維細胞；WI-38說明書準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人胚胎肺成纖維細胞；WI-38說明書
形態(tài)特性成纖維細胞

生長特性貼壁生長

特征特性WI-38人二倍體細胞系來自3個月的正常胚胎肺組織。該細胞系是首株用于人類疫苗制備的人二倍體細胞系。培液中添加TNFalpha可以促進細胞生長。

培養(yǎng)條件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況P(15+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到人胚胎肺成纖維細胞；WI-38說明書后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
HSP-20*豬熱休克蛋白20規(guī)格48T/96T

NE*豬去甲腎上腺素規(guī)格48T/96T

GLUT2*豬葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2規(guī)格48T/96T

Prednisolone*豬潑尼松龍規(guī)格48T/96T

CORT*豬皮質(zhì)酮/腎上腺酮規(guī)格48T/96T

Cortisol*豬皮質(zhì)醇規(guī)格48T/96T

BNP*豬腦鈉素/腦鈉尿肽規(guī)格48T/96T

SGLT1*豬鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運載體1規(guī)格48T/96T

eNOS-3*豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3規(guī)格48T/96T

eNOS*豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶規(guī)格48T/96T
人胚胎肺成纖維細胞；WI-38說明書腺苷酸激酶-1AdenylateKinase1(AK-1)腺苷酸激酶-10.5mgAdenylateKinase1(AK-1

ADFP/ADRP/adipophilin脂肪組織分化相關蛋白抗原ADFP/ADRP/adipophilin脂肪組織分化相關蛋白抗原0.5mgADFP/ADRP/adipophilin脂肪組織分化相關蛋白抗原

ADH/AVPpeptide抗利尿激素/血管升壓素抗原（和肽素）1mgADH/AVPpeptide抗利尿激素/血管升壓素抗原（和肽素

AdipoR1(adiponectinreceptor1)脂聯(lián)素受體-1(抗原)0.5mgAdipoR1(adiponectinreceptor1

AdipoR2(adiponectinreceptor2)脂聯(lián)素受體-2(抗原)0.5mgAdipoR2(adiponectinreceptor2

Adiponectin脂聯(lián)素（多肽抗原）0.5mgAdiponectin脂聯(lián)素（多肽抗原

ADM(Adrenomedullin)ProAM-N20Rat,human,mo,pig,dog,bov腎上腺髓質(zhì)素蛋白(N端20肽)0.5mgADM(Adrenomedullin

ADM(Adrenomedullin)(22-52)腎上腺髓質(zhì)素（22-52）0.1mgADM(Adrenomedullin
冷凍保存細胞之方法：
人胚胎肺成纖維細胞；WI-38說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。