ELISA試劑盒裂解方法
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果ELISA試劑盒檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。 100mg 羥苯丁酯 供檢查用 常溫，避光 190010-201001
1ml N-乙烯-2-吡咯烷酮 供檢查用 常溫，避光 190012-201001
1ml 一縮二丙二醇 供檢查用 常溫，避光 190020-201001
1ml 二縮三丙二醇 供檢查用 常溫，避光 190021-201001
50mg 棕櫚酸甲酯 供檢查用 常溫，避光 190030-201001
500mg 硬脂酸 供系統(tǒng)適用性 常溫，避光 190032-201001
50mg 花生酸甲酯 供檢查用 常溫，避光 190035-201001
25mg 山崳酸甲酯 供檢查用 常溫，避光 190037-201001
25mg 二十四烷酸甲酯 供檢查用 常溫，避光 190039-201001
100mg 異山梨酯 供鑒別用 常溫，避光 190043-201001
1ml 乙酸薄荷酯 供鑒別用 常溫，避光 190044-201001
100mg 交聯(lián)聚維酮 供鑒別用 常溫，避光 190045-201001
1ml 鄰苯二甲酸二乙酯 供鑒別用 常溫，避光 190047-201001
200mg 環(huán)拉酸鈉 供鑒別用 常溫，避光 190048-201001
ELISA試劑盒500mg 山崳酸甘油酯 供鑒別用 常溫，避光 190049-201001
200mg 聚丙烯酸樹脂Ⅱ 供鑒別用 常溫，避光 190051-201001
200mg 聚丙烯酸樹脂Ⅲ 供鑒別用 常溫，避光 190052-201001 |
