UACC812細(xì)胞人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)預(yù)準(zhǔn)備：
首先是準(zhǔn)備各種溶液。
*是配制溶液過程中要用到的水。水用純水，高壓滅菌之后，再去內(nèi)毒素。去內(nèi)毒素方法很多，*簡(jiǎn)單可以放在烘箱180度3小時(shí)。或者過去內(nèi)毒素的柱子后，高壓滅菌。
第二，各種溶液滅菌：
抗生素用去內(nèi)毒素水配制后，直接過濾除菌（過0.22u濾頭）?？梢杂靡淮涡詿o菌注射器過一次性0.22u濾頭。
現(xiàn)在用的培養(yǎng)液，如果是商業(yè)化液體培養(yǎng)基，不用處理。如果是粉末，需要用去內(nèi)毒素水在生物安全柜（或凈工作臺(tái)）進(jìn)行配制，再過濾除菌。可以先配濃縮液（如10×），過濾除菌后。再用滅菌去內(nèi)毒素水稀釋成1×培養(yǎng)液。
第三，培養(yǎng)液的配制：
培養(yǎng)液加上合適比例的血清即可。但血清一般保存于－20℃，一般解凍是放在4℃冰箱解凍，耗時(shí)長(zhǎng)，而且必須解決之后，才能進(jìn)行培養(yǎng)基的配制。所以要提前幾個(gè)小時(shí)就將血清從－20℃轉(zhuǎn)入4℃，以期解凍。當(dāng)然如果這一次就需要用完的話（是指用這些血清配制的培養(yǎng)液都用完），也可以放到37℃解凍。
第四，*重要的是保證過程中無菌。
液體必須要分裝。無論過程中用到的培養(yǎng)液、血清、PBS、生理鹽水、抗生素盡量分裝。分裝是為了防止污染。如果操作有誤，僅能威脅到其中一支，而非整個(gè)。
培養(yǎng)液、血清、PBS、生理鹽水分裝為20mL、50mL或100mL/管
抗生素可分裝為1mL/管。
分裝*先于UACC812細(xì)胞人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞細(xì)胞操作
第五，操作之前，培養(yǎng)液先放到37度的細(xì)胞培養(yǎng)箱里復(fù)溫。原因：盡量減少對(duì)細(xì)胞的刺激。低溫對(duì)于細(xì)胞也是一個(gè)刺激因素。
第六，操作之前，大腦先過一遍此次操作所需要用到的所有用具。將所有用具先放到無菌臺(tái)面上。減少拿入拿出的動(dòng)作，保證無菌。（如果萬一發(fā)現(xiàn)少拿了什么，也不要緊，再加上就是。如果是槍頭盒、移液管等用具，*先用消毒酒精噴一下）。
第七，操作之前，帶著的手套先噴消毒酒精。然后再進(jìn)入工作臺(tái)。等一分鐘，等手套上的酒精揮發(fā)之后再進(jìn)行操作。
|
會(huì)員_a.png)