在ELISA試劑盒中一般有二次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，此時(shí)反應(yīng)的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定的要求，保溫容器*是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應(yīng)疊在一起。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒應(yīng)該是金屬的，傳熱容易。如用保溫箱，空濕盒應(yīng)預(yù)先放在其中，以平衡溫度，這在室溫較低時(shí)更為重要。加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便不時(shí)觀察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng) Elisa試劑盒的洗滌也是非常關(guān)鍵的  洗滌在ELISA試劑盒過(guò)程中不是反應(yīng)聚，但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯待塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。因此在ELISA試劑盒測(cè)定的反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。在標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯一類物質(zhì)即右達(dá)到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質(zhì)，常作為助溶劑。根據(jù)脂肪酸的種類而對(duì)聚山梨酯編號(hào)，結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯20，在ELISA中為常用。它的洗滌效果好，并具有減少非特異性吸附和增強(qiáng)抗原抗體結(jié)合的作用。 |
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