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人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)正確的操作方法是什么?
點(diǎn)擊次數(shù):877 更新時間:2018-08-14

   人ELISA試劑盒在測定此類激素時,有必要在接近相連的時間距離內(nèi)采用數(shù)份血樣本,以其中心值為測定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r,血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測,應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的zui適時間抽血檢測。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮以下幾個方面:
(1)要留心避免出現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為符號酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡單在溫育進(jìn)程中吸附于固相,然后與后邊參與的HRP底物反應(yīng)顯色。
(2)樣本的收集及血清分別中要留心盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)作分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作符號的測定辦法發(fā)作非特異性攪擾。
(3)血清標(biāo)本如是以無菌操作分別,則能夠在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須留心避免因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)作的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)作損壞作用,然后引起假陰性作用。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留心,不要進(jìn)行劇烈振蕩,重復(fù)倒置混勻即可。
(5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所形成的的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心堆積后取上清檢測。
    在臨床實(shí)驗(yàn)室,對試劑準(zhǔn)備一般不太留心,一般的做法是,在實(shí)驗(yàn)時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后邊溫育時間不可的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備zui為要害的是,在實(shí)驗(yàn)開端前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測定,以使試劑盒在運(yùn)用前與室溫平衡。這樣做的目的,首要是為了在后邊的溫育反應(yīng)進(jìn)程中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地抵達(dá)所要求的高度,以滿足測定要求。其次,現(xiàn)在的產(chǎn)品人ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用時對所供給的濃縮液稀釋,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時,則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前暫時。

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人ELISA試劑盒

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