引起小鼠elisa試劑盒測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論。
（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與雞ELISA試劑盒系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。ELISA試劑盒解決該情況的辦法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測(cè)抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
（2）補(bǔ)體
小鼠elisa試劑盒系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q 可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig （s） 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將雞ELISA試劑盒系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig （s） ，但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原。為避免以上情況出現(xiàn)，小鼠elisa試劑盒解決的辦法是：測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。 |
會(huì)員_a.png)