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動(dòng)物免疫操作技術(shù)分析

免疫原用無(wú)菌鹽水稀釋并與佐劑混合，腹腔注射抗原與佐劑*混勻后形成的穩(wěn)定乳狀液，大鼠elisa試劑盒在免疫原提供持續(xù)的免疫應(yīng)答基礎(chǔ)上進(jìn)行加強(qiáng)免疫

周期 第1天 采血0.2ml（獲得0.1ml免疫前血清）

*次免疫（抗原加弗氏*佐劑）

第14天 第二次免疫（抗原加弗氏不*佐劑）

第21天 采血和ELISA檢測(cè)

第35天 第三次免疫（抗原加弗氏不*佐劑）

第42天 采血和ELISA檢測(cè)

第56天 第四次免疫（抗原溶于PBS或鹽水）

第61天 細(xì)胞融合

大鼠elisa試劑盒操作方法

（1）小鼠腹水用冷PBS液稀釋4倍后，于1.00×105轉(zhuǎn)離心30min，去沉淀。

（2）在4℃于上清中緩緩滴加飽和硫酸銨液，邊加邊攪拌，使溶液zui終為50%硫酸銨濃度。

（3）此溶液置冰中30min~60min，然后5000r/min離心10min，去上清。

（4）將沉淀溶于Tris－HCl緩沖液（40mMol/LNaCl）中（溶液可能混濁）。

（5）裝入透析袋于Tris－HCl緩沖液（20mMol/LNaCl）中透析除鹽。

（6）離心去沉淀。 （7）溶液稀釋?zhuān)?:100或更高倍稀釋?zhuān)┖?，?80nm測(cè)蛋白含量，估計(jì)蛋白質(zhì)含量1A280unit=0.8mg蛋白質(zhì)一般每ml腹水中，含有總蛋白約25mg~36mg。

（8）過(guò)DEAE—纖維素柱：纖維素柱高40cm，以20mMol/LNaClTris緩沖液平衡。大鼠elisa試劑盒透析樣品以Tris緩沖液等量稀釋。