細(xì)胞污染主要是指細(xì)胞培養(yǎng)液中混入對細(xì)胞生存有害的成分或細(xì)胞成分不純。細(xì)胞培養(yǎng)時的污染主要包括3個方面：①微生物污染：如支原體、病毒、細(xì)菌和真菌。②化學(xué)污染：如重金屬或其他非培養(yǎng)必需化學(xué)試劑。③細(xì)胞交叉污染。本節(jié)主要介紹微生物污染。 一、細(xì)胞污染的檢測 (一)真菌污染 在微生物污染中，以真菌污染zui多。zui常見真菌：煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。真菌種類繁多，形態(tài)各異，但污染后很容易發(fā)現(xiàn)。肉眼可見，大多呈白色或zui黃色小點漂浮于培養(yǎng)液表面；鏡下觀察呈絲狀、管狀或樹枝狀菌絲，縱橫交錯穿行于細(xì)胞之間。但是念珠菌和酵母菌呈卵圓形態(tài)，散在于細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間牛長。 (二)細(xì)菌污染及其檢測 大腸埃希菌、枯草桿菌、假單胞菌和葡萄球菌等是較常見的污染細(xì)菌。細(xì)菌污染后大多能改變培養(yǎng)液pH使培養(yǎng)液變混濁；多數(shù)情況下培養(yǎng)液短期內(nèi)顏色變黃，出現(xiàn)明顯污濁現(xiàn)象。也有的對培養(yǎng)液無肉眼可見影響，只在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)菌體時才能感知污染。 (三)支原體污染 支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中zui常見、不易被察覺并可以干擾實驗結(jié)果的一種污染。細(xì)胞受支原體污染后，多數(shù)細(xì)胞無明顯變化，或有微細(xì)變化卻由于傳代和換液而被緩解。外觀上往往給人以“正常”的感覺，實則污染細(xì)胞會受到多方面潛在的影響，如細(xì)胞變形、抑制細(xì)胞生長。 不同的微生物污染對細(xì)胞的影響有差別，檢測方法也不盡相同：可以通過目測、顯微鏡觀察、電鏡檢查、微生物培養(yǎng)實驗、免疫學(xué)和分子生物學(xué)等方法進行確定。 二、細(xì)胞污染的排除 培養(yǎng)的細(xì)胞一旦被微生物污染，應(yīng)及時處理。通常選高壓滅菌被污染的細(xì)胞，然后棄掉。如果有價值的細(xì)胞被污染，并且污染程度比較輕，可通過及時排除污染物，挽救細(xì)胞恢復(fù)正常。常用的排除微生物污染方法有如下幾種： (一)抗生素排除法 抗生素是細(xì)胞培養(yǎng)中殺滅微生物的主要手段。一些有價值的細(xì)胞被污染后，需用抗生素挽救，在這種情況下，可采用5～lO倍于常用量的沖擊法，加入高濃度抗生素后作用24～48h，再換人常規(guī)培養(yǎng)液。 (二)加溫除茵 根據(jù)支原體耐熱性能差的特點。有人將受支原體污染的細(xì)胞置于4l℃中作用5～10h(zui長可達(dá)18h)以殺滅支原體。但41℃對培養(yǎng)細(xì)胞本身也有較大影響，故在處理前，應(yīng)先進行預(yù)試驗。確定mzui大限度殺傷支原體而對細(xì)胞影響較小的處理時間。 (三)動物體內(nèi)接種 受微生物污染的腫瘤細(xì)胞可接種在同種動物皮下或腹腔，借動物體內(nèi)免疫系統(tǒng)消滅污染的微生物，腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長，待一定時間后，從體內(nèi)取出再進行培養(yǎng)繁殖。 (四)與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng) 在良好的體外培養(yǎng)條件下巨噬細(xì)胞可存活7～10d，并可分泌一些細(xì)胞生長因子支持其他細(xì)胞的克隆生長。與體內(nèi)的情況相似，巨噬細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下仍然可吞噬微生物并將其消化。利用96孔培養(yǎng)板將極少量的培養(yǎng)細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，可以在高度稀釋培養(yǎng)細(xì)胞、極大地降低微生物污染程度的同時，更有效地發(fā)揮巨噬細(xì)胞清除污染的效能。本方法與抗生素聯(lián)合應(yīng)用效果更佳。 |
