腫瘤干細胞鑒定 1．一般生物學特征鑒定主要通過觀察腫瘤干細胞的形態(tài)和生長特征以及通過核型分打鑒定腫瘤干細胞。形態(tài)多為圓形，大小不一。倍增時間較短，細胞生長密度增加，細胞核岔裂指數(shù)較高，并且具有無限增殖能力，細胞侵襲能力較強等特征。大部分腫瘤干細胞處于G0期。 2．體外克隆形成能力或腫瘤球形成能力鑒定 (1)克隆形成試驗：將分選的陰性和陽性細胞分別以低濃度接種到96孔培養(yǎng)板，每孔1種100～200個細胞，大約7d后觀察其各自克隆形成情況。 (2)集落形成試驗：白血病干細胞可進行集落形成試驗，將分離的陰性和陽性細胞分別1種到合適的集落培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，一般14 d后觀察集落(>20個細胞)形成數(shù)量。白血病干細胞能夠形成小的分散的集落，并且很少發(fā)生紅系細胞分化。 (3)實體瘤干細胞的腫瘤球形成試驗：將分離得到的腫瘤干細胞重懸于合適的培養(yǎng)液中，進行倍比稀釋，并接種到96孔培養(yǎng)板，zui終細胞稀釋的范圍從200個／孔到1個／孔。培養(yǎng)7d后，計算腫瘤球形成的總數(shù)目以及腫瘤球形成占接種細胞的比例。腫瘤干細胞形成腫瘤球能力更強，得到腫瘤球的比例也增高。 3．分化能力鑒定 (1)體外分化能力的鑒定：常采用免疫細胞化學染色、流式細胞儀分析以及RT—PCR等方法進行鑒定。 (2)體內(nèi)移植試驗：將腫瘤干細胞注射到有嚴重免疫缺陷的實驗小鼠體內(nèi)，如一次性注射100、200、500或1000個細胞，然后觀察其體內(nèi)成瘤的情況。檢測分化出不同成熟細胞的能力。將腫瘤干細胞移植到NOD／SCID鼠內(nèi)，細胞可以在受體鼠內(nèi)連續(xù)傳代，分離出的腫瘤干細胞二次移植時仍能產(chǎn)生具有異質(zhì)性癌細胞的腫瘤，并可多次重復(fù)，得到的腫瘤與原代腫瘤一致。 4．腫瘤干細胞相關(guān)分子表達的檢測 腫瘤干細胞也能檢測到與干細胞自我更新和分化相關(guān)的基因表達。例如，腦腫瘤干細胞除了表達CDl33，還具有SOX一2、musashi一1、Bmi一l等神經(jīng)干細胞和其他干細胞的基因特征。 |
