人巨噬細胞可從外周血或經(jīng)斑蝥激發(fā)的皮皰液中獲取，也可從肺灌洗液或患者腹膜透析液中分離，但操作煩瑣，得量不多。許多實驗室在進行基礎(chǔ)或配合臨床研究巨噬細胞功能及其與疾病的關(guān)系、或篩檢免疫增強藥物和探討其作用機制時，常選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象。 (一)鼠腹腔巨噬細胞制備 1．用無菌注射器吸取3％硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內(nèi)。 2．四日后，注射羊紅細胞(1％懸液)lml于小鼠腹腔內(nèi)。 3．注射1h后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml預(yù)溫的PBS，同時用手反復(fù)揉搓腹腔約1～2min，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細胞 4．用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內(nèi)。 5．用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。 (二)炭粒廓清試驗 正常小鼠肝中庫普弗細胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10％炭粒，據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復(fù)取靜脈血。測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。 (三)吞噬功能的檢測 1．雞紅細胞(CRBC)懸液的制備取雞血l～2ml，阿氏液抗凝。試驗前用無菌生理鹽水沖洗3次，然后配成5％CRBC懸液。 2．吞噬試驗取皮皰滲出液O．5ml，加上述CRBC懸液0．01 ml混勻，置37℃水浴中30min，每隔10min輕輕搖動1次。1000r／mln離心5min，棄上清液。留少許液體將細胞充分混勻．涂片，甲醇固定，吉姆薩染色，油鏡下觀察并計數(shù)100～200個巨噬細胞。 3．結(jié)果觀察 (1)吞噬細胞百分率：即100個巨噬細胞中吞噬有CRBC的細胞數(shù)。 (2)吞噬指數(shù)：將100個巨噬細胞所吞噬的CRBC的總和除以100，所得每個巨噬細胞吞噬CRBC的平均數(shù)，即吞噬指數(shù)。 |
