(一)試驗(yàn)原理 細(xì)胞有絲分裂指數(shù)(mitotic index，MI)是指屬于分裂期的細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分率．用于表示細(xì)胞增殖旺盛的程度，也可用于檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。用蓋玻片培養(yǎng)法培養(yǎng)細(xì)胞，做固定和染色后，鏡下觀察和計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中處于分裂期的細(xì)胞數(shù)并計(jì)算MI。 (二)材料 1．待檢材料(藥物)。 2．細(xì)胞培養(yǎng)成層的貼壁細(xì)胞。 3．試劑 甲醇、3％吉姆薩染液。 4．器材CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2．2 cm×2．2 cm，需預(yù)先清洗和滅菌處理)、塑料培養(yǎng)皿(3．5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹(shù)膠。 (三)實(shí)驗(yàn)方法 1．將細(xì)胞消化成單個(gè)細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分瓶培養(yǎng)，分成不加藥的對(duì)照組和加人不同劑量藥物的實(shí)驗(yàn)組。 2．細(xì)胞傳代培養(yǎng)的方法培養(yǎng)細(xì)胞，并制成濃度為105／ml的細(xì)胞懸液。 3．將清洗和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液搖勻后接種于培養(yǎng)皿中，各皿中接種量相同。 4．分別于培養(yǎng)24 h、48ht和72h后從培養(yǎng)皿中取出蓋玻片，在Hanks液中漂洗2～3次。 5．先用甲醇固定30 min，再用吉姆薩染液染色。晾干后用中性樹(shù)膠封片。 6．油鏡下或高倍鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中處于分裂期的細(xì)胞數(shù)。 7．計(jì)算MI按下列公式計(jì)算MI。 (四)結(jié)果與分析 將對(duì)照組和藥物組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪制成直方圖并加以比較，也可繪制成MI曲線進(jìn)行比較： (五)注意事項(xiàng) 1．為了減少誤差，實(shí)驗(yàn)者必須熟悉各期分裂象細(xì)胞的形態(tài)特征，該實(shí)驗(yàn)自始至終由一人完成，當(dāng)兩人以上觀察時(shí)，應(yīng)掌握相同的標(biāo)準(zhǔn)。 2．MI曲線與細(xì)胞生長(zhǎng)曲線趨勢(shì)基本相似，但不*相同。如果在細(xì)胞增長(zhǎng)達(dá)飽和密壁并進(jìn)入停止期后．細(xì)胞數(shù)量很多，而分裂象細(xì)胞可*消失。 3．細(xì)胞在蓋玻片上的密度常不均勻，細(xì)胞密集區(qū)與區(qū)的分裂象細(xì)胞數(shù)目可能不同。計(jì)數(shù)時(shí)要選擇密度近似區(qū)，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。 |
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